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三步酶消化法高效分离兔原代关节软骨细胞及体外培养观察

Efficient isolation of chondrocytes from rabbit articular cartilage with three-step enzymatic digestion and observation of their biological characteristics during cultivation in vitro

摘要:

目的观察设计的三步酶消化法分离原代关节软骨细胞的效果,并对体外培养不同代次细胞的生物学活性进行评价.方法三步酶消化法设计为以培养液配制的1 g/L胰蛋白酶及1 g/L EDTA混合液、1 g/L透明质酸酶和2 g/LⅠ型胶原酶顺序消化关节软骨分离细胞,检测细胞收获效率和存活率;体外传代培养观察细胞形态、生长及胞外基质中Ⅰ型和Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚集体等的变化.结果 (1)关节软骨经三步酶消化基质逐步解离和降解,细胞得以完全释放和分离,每克软骨的细胞收获量平均为50.3×106个细胞,细胞存活率平均为98.8%.(2)原代和第一代细胞附壁生长呈三角形或多角形,生长融合时呈卵圆形,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝异染反应均呈阳性,原代细胞外基质有高的硫酸糖胺多糖含量为(92±10) μg/cm2;第三代后细胞逐渐变为梭形,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性,甲苯胺蓝异染反应明显减弱,第四代细胞外基质的硫酸糖胺多糖含量为(48±12) μg/cm2.结论 (1)三步酶消化法可使关节软骨基质完全消化降解,具有高细胞收获率、高细胞存活率和操作简便等特点.(2)原代和第一代软骨细胞具有良好的生物学活性,而第三代以后的细胞生物学活性低下.

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作者: 周强 [1] 李起鸿 [1] 戴刚 [1] 石国华 [1]
第一作者: 周强
期刊: 《中华外科杂志》2005年43卷8期 522-526页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: R68
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3760/j:issn:0529-5815.2005.08.012
发布时间: 2005-07-07
基金项目:
国家自然科学基金 西南医院科技创新项目
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