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乙型肝炎病毒X基因诱导卵圆细胞恶性转化的研究

The studies of hepatitis B virus X gene induces oval cell malignant transformation

摘要:

目的 研究乙型肝炎病毒X(HBx)基因对卵圆细胞转化和分化的影响.方法 用稳定表达HBx的转基因即圆细胞株pEGFP-HBx卵圆细胞作为实验组,pEGFP卵圆细胞及LE/6卵圆细胞作为对照组,运用倒置相差显微镜和透射电镜、流式细胞术、糖原染色、软琼脂生长、实时定量PCR、细胞免疫化学技术观察和检测pEGFP-HBx卵圆细胞在细胞形态、细胞周期、分化标志物、癌基因c-myc及TGF-α的变化.结果 (1)与对照组相比,pEGFP-HBx卵圆细胞体积增大,核具有明显异型性;(2)流式细胞仪检测显示,与对照组相比,pEGFP-HBx卵圆细胞G0/G1期细胞百分比下降,S期和G2/M期细胞百分比明显升高,而且非整倍体细胞明显增多;(3)糖原染色显示,pEGFP-HBx卵圆细胞胞质内可见大量糖原颗粒;(4)软琼脂中可见pEGFP-HBx卵圆细胞克隆形成;(5)癌基因c-myc及TGF-α表达量明显增高,卵圆细胞分化指标HNF-4α、AFP表达上升,CK-7、CK-19表达下降,未见有cps1 mRNA表达.结论 HBx基因可以引起卵圆细胞异常分化,并直接诱导卵圆细胞发生恶性转化.

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abstracts:

Objective To find out the mechanisms of HBx gene inducing oval cell malignant transformation into hepatoma carcinoma cell. Methods The changes of morphology, cell cycle,differentiated markers,c-myc and TGF-α in pEGFP-HBx oval cells strain,which stably expressed HBx gene, were studied by inversion phase contrast microscope and transmission electron microscopy, flow cytometry, periodic acid-schiff (PAS) staining, soft agar growth assay,real-time PCR,immunlocytochemistry. pEGFP-oval cells and LE/6 oval cells were used as control groups. Results (1) The pEGFP-HBx oval cells showed biger in size with malformed nucleus as compared with control groups. (2) Flow cytometry showed that, in contrast with the control groups,the propotion of pEGFP-HBx oval cells arrested in GO/G1 phase decreased but in S or G2/M phase rose. Moreover, the population of aneuploid cells increased obviously. (3) PAS staining showed that there were many glycogen granules in the cytoplasm of pEGFP-HBx oval cell. (4) The pEGFP-HBx oval cell formed colonies in the soft agar. (5) Compared with the control groups,the expression of HNF-4α,AFP, c-myc and TGF-αt rose obviously ,whereas the expression of CK-7 and CK-19 decreased. And the expression of cps1 mRNA was not in the extent of detection. Conclusions The HBx gene can provoke abnormal differentiation of oval cell and induce oval cell malignant transformation.

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作者: 王艳军 [1] 梁慧芳 [1] 陈孝平 [1] 董为 [1] 李常海 [1] 陈琳 [1] 刘利平 [1]
第一作者: 王艳军
期刊: 《中华外科杂志》2009年47卷18期 1410-1414页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: R6
栏目名称: 论著
DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5815.2009.18.015
发布时间: 2009-12-07
基金项目:
国家自然科学基金 湖北省肝脏外科临床研究中心资助项目
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