换一批Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌生物被膜的抗菌作用
The antimicrobial effect of airway epithelial cells transfected by elafin on Pseudomonas aeruginosa biofilm
摘要目的 探讨Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)生物被膜(biofilm,BF)的抗菌作用.方法 体外平板法制备Pa生物被膜模型,用银染法及扫描电镜鉴定.体外培养A549细胞,将pEGFP-N1-Elafin重组到A549细胞,倒置荧光显微镜观察转染情况.采用猪胰弹性蛋白酶(NE组)、铜绿假单胞菌(Pa组)上清、大肠埃希杆菌(E.coli组)上清分别诱导孵育重组细胞24 h,另设转染未含Elafin基因空载体的A549细胞作为对照组.将成熟BF载体放入4组中继续孵育8 h,扫描电镜观察4组BF结构的变化,并于第8小时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细菌存活数.结果 扫描电镜下观察到3个诱导组的BF结构较对照组的BF明显松散,尤以Pa组和NE组为甚;NE组[(3.238±0.316)×106 CFU/cm3]、Pa组细菌数量[(3.317±0.247)×106 CFU/cm2]均较对照组[(5.946±0.453)×106 CFU/cm3]显著减少(P＜0.01),E.coli组细菌数量[(5.138±0.391)×106 CFU/cm2]较Pa组和NE组减少,差异均有统计学意义(P＜0.01).3个诱导组BF细菌清除率与对照组相比分别为45.6%、44.2%和13.6%.结论 Elafin重组气道上皮细胞能有效清除Pa生物被膜中的细菌,而Pa产物也是Flafin表达的有效诱导物.
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