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正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1基因转染对肾小球系膜细胞凋亡及相关基因表达的影响

Effects of sense and antisense tissue inhibitor metalloproteinase-1 on apoptosis of rat glomerular mesangial cells and its related-gene expressions

摘要:

目的 探讨正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)对肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法 利用前期工作中克隆出的人TIMP-1全长cDNA,分别构建出表达正义及反义TIMP-1的重组真核表达载体pcDNA3-TIMP-1(PTs)、pcDNA3-ATIMP-1(PTas),并将上述重组质粒转染至大鼠的肾小球系膜细胞中,Northern杂交检测正、反义TIMP-1的表达。无血清诱导大鼠系膜细胞凋亡,利用DNA缺口末端标记(TUNEL)分析、DNA电泳技术在无血清后的不同时间点检测细胞凋亡,RT-PCR的方法检测凋亡相关基因的表达。结果 转染PTas的大鼠系膜细胞可以高效表达反义TIMP-1,于无血清诱导12 h开始发生凋亡;无外源基因转染及空载体转染的大鼠系膜细胞在无血清48 h发生凋亡;而转染正义TIMP-1的大鼠系膜细胞可高效表达正义TIMP-1,在无血清4 d时才发生凋亡。TIMP-1的高表达或低表达可引起大鼠系膜细胞bax的下调或上调,但并不影响bcl-2的表达。结论 TIMP-1可以抑制无血清诱导的大鼠系膜细胞的凋亡,反义TIMP-1对之则有促进作用。这提示TIMP-1 在肾脏除了抑制细胞外基质的作用外还具有新的功能。

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