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骨髓间充质干细胞在激光损伤大鼠视网膜下分化的观察

Observation of bone marrow mesenchymal stem cells after subretinally transplanted into laser-injured rat retina

摘要:

目的鉴定骨髓间充质干细胞(MSC)在体外不诱导的条件下移植于掺钕钇铝石榴石(Nd:YAG)激光损伤大鼠视网膜后的定位以及蛋白表达情况.方法体外培养大鼠MSCs,用荧光染料4′,6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记MSCs, 视网膜下移植后分别于10、20、35和 50 d处死动物,做DAPI荧光观察,并在阳性的连续切片上作神经元核(NeuN), 神经元特异性烯醇化酶(NSE), 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和角蛋白(CK)免疫组化染色及HE染色.分别于损伤前及损伤后即刻、1~7周检测损伤移植组、损伤组和损伤注射生理盐水组的视网膜电图(ERG)b波分析.结果培养的MSC集落生长迅速,均一性好;DAPI染色观察表明,10 d时移植细胞多集中于移植部位周围,但分布散乱;20 d时可见阳性细胞分布范围扩大,分布于视网膜视锥、视干细胞层、双极细胞层及节细胞层;到35 d阳性细胞范围进一步扩大,且细胞向损伤部位迁移; 50 d观察损伤范围与35 d相比扩大不明显.免疫组织化学染色发现阳性区域的细胞在NeuN、NSE、GFAP和CK 的表达有不均一性.检测到的阳性区域视网膜未见到玫瑰花结样结构,但某些区域的细胞排列不整齐,在某些部位有细胞层增生.HE染色表明移植组损伤的恢复好于损伤对照组,ERG b波检测表明5周后损伤移植组的b波水平高于对照组.结论 MSC在视网膜下移植后可与原视网膜结构相融合,检测到的阳性细胞分布于视网膜色素上皮层、视细胞层、双极细胞层及节细胞层,但细胞的排列和蛋白表达仍有紊乱.MSC的移植对激光损伤斑及ERG b波的恢复有促进作用.

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