换一批
换一批肺动脉内皮细胞缺氧时内皮型一氧化氮合酶基因表达的变化及蛋白激酶C亚型的作用
Effects of hypoxia on endothelial nitric oxide synthase gene expression in pulmonary artery endothelial cells and the role of protein kinase C isoforms
摘要：
目的研究蛋白激酶C(PKC)及其亚型对缺氧引起的肺动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达变化的调控作用.方法将原代培养的猪肺动脉内皮细胞置于缺氧(5%O2)条件培养2、6、12、24、48 h,用RT-PCR的方法检测eNOS mRNA的含量.用蛋白质免疫印迹技术检测eNOS和8种PKC亚型的表达水平.加入选择性PKC抑制剂BIMⅠ(1 μmol/L)和G6983(1 μmol/L)后观察其对5%O2所引起的eNOS mRNA水平变化的影响.采用瞬时转染的方法,通过荧光素酶报告基因实验检测eNOS基因转录起始点上游长1.6 kb启动子区域的活性.加入转录抑制剂放线菌素D后比较不同时间点常氧培养组和5%O2培养组eNOS mRNA的含量.结果 5%O2培养12 h可使肺动脉内皮细胞eNOS表达增加,24 h达高峰.缺氧24 h组eNOS mRNA和蛋白质水平分别是常氧组的171%±18%(P<0.01)和166%±21% (P<0.05).BIMⅠ和G6983可抑制缺氧24 h引起的eNOS mRNA表达上调.缺氧时新型蛋白激酶Cε(nPKCε)发生了膜转位.报告基因实验表明,缺氧24 h肺动脉内皮细胞eNOS基因启动子活性明显增加,为常氧组的(2.29±0.73)倍.放线菌素D实验表明缺氧对肺动脉内皮细胞eNOS mRNA的稳定性无明显影响.结果表明,缺氧上调eNOS mRNA是由于基因转录增强而不是mRNA稳定性增加所致.结论缺氧通过增强肺动脉内皮细胞eNOS基因的转录上调eNOS基因的表达,此过程与nPKCε的激活有关.
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作者：
作者单位：
贵阳医学院病理生理学教研室
[1]
430030,武汉,华中科技大学同济医学院病理生理系
[2]
期刊：
《中华医学杂志》2004年84卷2期 146-151页
MEDLINEISTICPKUCSCD
主题词：
低氧(Hypoxia)肺动脉(Pulmonary Artery)内皮细胞(Endothelial Cells)一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase)基因表达(Gene Expression)
分类号：
R31
栏目名称：
基础论著
DOI：
10.3760/j:issn:0376-2491.2004.02.014
发布时间：
2004-03-26
基金项目：
国家自然科学基金
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