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SARS冠状病毒N蛋白在免疫荧光诊断技术中的应用

An immunofluorescence assay for the detection of SARS associated coronavirus antibody based on recombinant nucleocapsid antigen and its application

摘要:

目的应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达SARS-CoV N基因,产生无感染性的核蛋白,作为诊断抗原,用于检测血清中SARS特异性抗体.方法从一例输入性SARS病人血清中提取病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SARS-CoV N基因,将它插入昆虫杆状病毒,构建重组昆虫杆状病毒,转染sf 9昆虫细胞,经丙酮固定,制成SARS特异性诊断抗原,建立检测病人血清抗SARS-CoV抗体的免疫荧光试验(immunofluorescence assay, IFA).结果此抗原仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常人及其他发热病人血清不起反应.经双盲试验,与空斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)阳性的2003年SARS病人血清的符合率为97.8%;检测2004年广东新发4例SARS病人进展期血清均阳性,发病后第6天即可检出抗体1∶ 40阳性,至第9天,升至1∶ 640.结论此法用于检测病人血清中SARS抗体,具有特异性强、敏感性高,试剂制备简单、安全,不需P3实验室,为诊断与研究SARS提供新的途径和手段.

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