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树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究

The effect of stimulation of dendritic cell on HBV-epitopic cytotoxic T-lymphocyte

摘要:

目的探讨通过聚肌胞体外作用树突状细胞后改善慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能,并在体外活化自身T细胞获得高频数HBV特异性细胞毒性T细胞(CTL)的方法.方法分离慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞,在粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)的诱导下培养树突状细胞.培养的第7天加入聚肌胞刺激获得成熟树突状细胞, 经HBV core18-27肽负载后与自身T淋巴细胞共培养,通过酶联斑点计数法(Elispot)及MHC-肽四聚体法(Tetramer)比较病人T细胞未经自身树突状细胞刺激组、经HBV core18-27肽负载的自身树突状细胞刺激组、经聚肌胞促成熟的HBV core18-27肽负载的自身树突状细胞刺激组中HBV特异性的CTL的功能和频数.结果慢性乙型肝炎病人外周血单核细胞体外经GM-CSF和IL-4诱导可转化为树突状细胞,树突状细胞转化过程中聚肌胞的刺激可显著上调树突状细胞表面分子CD80、CD83的表达(P<0.01),促进树突状细胞的成熟.Elispot 法检测分泌IFN-γ的CTL的频数:病人T细胞未经自身树突状细胞刺激组分泌频数为:(9~28)/1×105T细胞,均值16;经HBV core18-27肽负载的自身树突状细胞刺激组频数为:(30~67)/1×105T细胞,均值为46;经聚肌胞促成熟的HBV core18-27肽负载的自身树突状细胞刺激组频数为:(59~130)/1×105T细胞,均值为98.三组数据进行配伍组方差分析,差异均有统计学意义(P<0.01).Tetramer 法检测HBV核心抗原肽特异性的CTL占CD8+T细胞的比例为:未经自身树突状细胞刺激组中:0.45 % ~1.74 %,均值0.77 %;经HBV core18-27肽负载的自身树突状细胞组:1.36 % ~2.65 %,均值1.92%;经聚肌胞促成熟后HBV core18-27肽负载的树突状细胞组:2.02% ~ 4.60 %,均值3.49 %.三组数据进行配伍组方差分析,差异均有统计学意义(P<0.01).结论慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞在体外经自身负载HBV core18-27抗原肽的树突状细胞刺激后,可获得高频数、功能较强的HBV特异性的CTL;在树突状细胞体外转化的过程中加入聚肌胞作为刺激剂可明显促进树突状细胞的成熟、增强树突状细胞功能,在负载HBV core18-27抗原肽后与自身T细胞作用可获得频数更高及功能更强的病毒特异性的CTL.

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