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利用RNA干扰技术抑制环氧合酶-2表达对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡影响的实验研究

Effects of inhibition of cyclooxygenase-2 by RNA interference on proliferation and apoptosis of human gastric cancer cells: an experimental study with human gastric cancer cells and mice

摘要:

目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法.方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果.四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况.15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞.抑制组:接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组:接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组:接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞.4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率.结果 WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%.COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次).正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490 g±0.017 g,5只)和(0.490 g±0.013 g,5只).抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050 g±0.003 g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%.结论 COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达.

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作者: 汪步海 [1] 钱伟 [1] 郜元军 [1] 王华枫 [1] 侯晓华 [1]
期刊: 《中华医学杂志》2006年86卷4期 266-271页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
分类号: R73
栏目名称: 论著
DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2006.04.012
发布时间: 2006-04-06
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