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脑死亡状态对巴马小型猪肝脏形态与功能的影响

How brain-dead state affects the hepatic morphology and function of Ba-Ma mini pigs and its mechanism

摘要:

目的探讨脑死亡状态对巴马小型猪肝脏的影响及其机制.方法巴马小型猪15只,随机分脑死亡组(B组)、灯盏花素处理组(P组)和对照组(C组),每组5只.用颅内加压法建立脑死亡模型.建模成功后,B组不行其他处理;P组分别于初次确认脑死亡后1、12 h时灯盏花素按2.5 mg/kg,加入100 ml生理盐水中,静脉滴注;C组仅开颅麻醉维持.脑死亡3、6、12、18和24 h取血清测丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β、IL-6水平.取脑死亡后6、12和24 h点肝组织行HE染色并免疫组化法测蛋白激酶C-α(PKC-α)的表达水平并RT-PCR法测PKC-α mRNA的变化,12、24 h点肝组织观察肝脏超微结构变化.结果初次判定巴马小型猪脑死亡后12、18和24 h:ALT水平C组分别为33.0±6.7、29.0±1.6和(36.6±5.6)U/L,B组分别为141.8±9.1、191.4±10.9和(238.6±10.4)U/L,P组分别为91.0±4.9、131.6±6.4和(175.6±7.0)U/L;AST水平C组分别为27.4±3.9、29.8±1.6和(29.2±3.4)U/L;B组分别为91.4±8.1、126.6±5.5和(184.4±5.4)U/L;组分别为59.2±6.1、86.8±5.5和(146.2±6.4)U/L;B组血清ALT、AST水平随着脑死亡时间的延长逐渐升高;明显高于C组,P组两者水平亦升高,但升高幅度较B组低.炎症介质在首次判定脑死亡后3、6、12、18和24 h的IL-1β水平,C组分别为5.91±0.17、5.91±0.10、6.06±0.12、6.08±0.12和(6.10±0.15)pg/ml,B组分别为8.26±0.21、9.17±0.08、10.30±0.11、12.53±0.35和(16.37±0.16)pg/ml,P组分别为7.75±0.12、8.08±0.11、9.25±0.21、11.44±0.19和(15.43±0.36)pg/ml;IL-6水平C组分别为17.35±0.59、18.04±0.23、17.99±0.83、17.77±1.05和(17.62±0.67)pg/ml,B组分别为29.50±1.92、37.92±1.69、46.32±1.70、56.62±1.95和(66.68±2.11)pg/ml,P组分别为21.27±1.05、23.65±1.09、31.46±1.91、37.60±1.75和45.16±1.9 pg/ml;TNF-α水平,C组分别为14.94±0.36、15.03±0.49、14.71±0.46、14.66±0.31和(14.64±0.63)pg/ml,B组分别为19.45±0.16、21.76±0.25、24.31±0.20、27.65±0.27和(31.35±0.16)pg/ml,P组分别为18.45±0.11、20.21±0.41、23.41±0.32、26.17±0.21和(28.36±0.20)pg/ml;B组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平随着脑死亡时间的延长逐渐升高;明显高于C组,P组三者水平亦升高,但升高幅度较B组低.6、12和24 h的肝细胞中PKC-α蛋白表达水平,C组分别为0.0887±0.0113、0.0950±0.0284和0.0994±0.0113,B组分别为0.1508±0.0108、0.3811±0.0382和0.6209±0.0312,P组分别为0.1091±0.0292、0.1284±0.0142和0.2995±0.0276;6、12和24 h肝细胞中PKC-α mRNA表达水平,C组分别为5782±594、5501±423和5729±533,B组分别为26789±3059、32877±5526和39869±6548,P组分别为24027±5012、20409±4793和14307±3786.PKC-α蛋白在C组肝细胞表达在胞浆内,仅见少量阳性细胞,B组6 h可见肝脏中阳性细胞显著增多,P组PKC-α蛋白表达阳性细胞较B组低.3脑死亡后肝脏中PKC-α mRNA的变化与PKC-α蛋白变化趋势相同.肝脏光镜及电镜下肝脏损伤变化B组明显重于C组,P组在脑死亡后12 h仅出现细胞水肿.结论脑死亡状态下肝脏出现功能与形态学的损伤性变化;PKC-α可能参与了这种损伤机制,灯盏花素能够抑制动物肝脏中PKC-α的活化,灯盏花素处理可以减轻肝脏这种损伤.

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