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骨髓间充质干细胞诱导分化表达角蛋白的信号机制

Mechanism of signal transduction of differentiation of mesenchymal stem cells into cytokeratin-expressing epidermoid cells

摘要:

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)分化为表皮样细胞过程中,相关P38、ERK、Rho等信号机制.方法(1)采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离扩增大鼠骨髓MSC,免疫细胞化学及流式细胞仪进行表面标志的检测.(2)定向诱导中磷酸化P38和ERK表达:分为正常对照组、单纯诱导组、Rho阻断组;培养1、3、5、7 d后,流式细胞检测磷酸化P38和ERK.(3)SB203580和PD98059对MSC诱导为表皮样细胞的影响:分为对照组、单纯诱导组、p38阻断组(在诱导液基础上加入SB203580),ERK阻断组(在诱导液基础上加入PD98059),诱导7 d后分别采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测各组细胞细胞角蛋白CK5/8、CK19的阳性表达率.(4)Rho阻断剂HA1077对CK5/8、CK19的影响:设正常对照组、单纯诱导组、RHO阻断组.取培养7 d的细胞,流式细胞检测CK5/8、CK19表达.结果(1)大鼠骨髓MSC在体外扩增后,免疫细胞化学及流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44表达阳性,CD34、CD45表达阴性.(2)磷酸化P38正常对照水平为0.02%.在诱导组1d(0.01%)、3 d(0.01%)变化不大,诱导5 d为0.04%,明显升高,7 d时(0.01%)复接近诱导前水平;磷酸化ERK对照水平为4.23%,诱导后3 d(0.39%)、5 d(0.40%)均呈下降趋势,7 d时(5.10%)恢复至诱导前水平.RHO阻断组:磷酸化P38水平在1、3、5和7 d,分别为1.11%、71.19%、0.25%、6.86%,均升高;ERK磷酸化在1、3、5和7 d,分别为6.17%、4.13%、3.97%和0.41%,其中7 d低于对照水平.(3)SB203580和PD98059对MSC诱导为表皮样细胞的影响:流式细胞显示诱导7 d后CK5/8、CK19阳性率分别为3.01%、6.47%;p38阻断组CK5/8、CK19阳性表达率分别为1.43%、5.41%,低于诱导组.ERK阻断组CK5/8、CK19阳性表达率分别为5.54%、7.56%.(4)HA1077对CK5/8、CK19的影响:单纯诱导组CK5/8阳性率为1.81%,CK19为10.19%;加入HA1077后,CK5/8为21.65%,CK19为39.41%,升高显著.结论P38途径在促进MSC分化为表皮样细胞过程中可能起积极作用,上游信号Rho阻断后可能增加P38途径途径激活,一定程度上促进MSC分化为表皮样细胞.

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作者: 白晓东 [1] 付小兵 [2] 张奇 [1] 孙同柱 [2]
期刊: 《中华医学杂志》2006年86卷18期 1269-1273页 MEDLINEISTICPKUCSCDCA
分类号: R3
栏目名称: 论著
DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2006.18.012
发布时间: 2006-06-27
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