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激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路对人结肠癌细胞增殖及相关基因的影响

Effects of extracellular signal-regulated kinase/mitogren-activated protein kinase signaling pathway activation on proliferation and cell cycle associated genes in human colon cancer cells

摘要:

目的 探讨野生型RAF和MEK持续激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路(ERK-MAPK)对人结肠癌细胞增殖及细胞周期相关基因的影响.方法 培养人结肠癌细胞系SW1116,脂质体介导RAF、MEK基因和空质粒转染,G418筛选阳性克隆.流式细胞仪分析细胞周期,光学显微镜下观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,生长曲线和软琼脂集落形成检测细胞增殖,实时定量PCR检测p21WAF1和p16INK4A及癌基因c-myc转录水平.结果 建立稳定表达RAF或MEK的细胞系,RAF或MEK高表达均能明显降低G0/G1期细胞百分比,促进细胞周期由G1向S期进行,增加DNA合成的S期细胞百分比,细胞活力和增殖力升高3~4倍,细胞分裂增殖旺盛.转染RAF/MEK质粒后,细胞均呈现p21WAF1和p16INK4A转录水平降低,c-myc转录水平升高.结论 ERK-MAPK信号通路激活可下调细胞周期相关基因p21WAF1和p16INK4A表达,并上调c-myc表达,减少G0期时相,加速G1/S期转化,促进细胞增殖.

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