shRNA抑制人骨髓间充质干细胞SMN1基因表达的研究-论文-万方医学网

shRNA抑制人骨髓间充质干细胞SMN1基因表达的研究

Effects of short hair RNA on the expression of SMN1 gene in human mesenchymal stem cells

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摘要：

目的构建在哺乳动物细胞中表达SMN1 shRNA的质粒,并初步探讨其对人骨髓间充质干细胞全长SMN mRNA及蛋白的抑制作用,为进一步建立脊髓性肌萎缩症细胞模型提供实验依据.方法根据GenBank中SMN1 cDNA序列设计5条SMN1靶向shRNA并将其克隆至pRNAT-U6.1/Neo载体中U6启动子的下游,形成能在细胞内表达SMN1特异性短发夹状RNA的重组质粒pshRNA-SMN1;在脂质体介导下将重组质粒pshRNA-SMN1转染人骨髓间充质干细胞(hMSC),RT-PCR、Western印迹分别检测fl-SMN mRNA及fl-SMN蛋白的表达.结果琼脂糖凝胶电泳及DNA测序证实重组质粒pshRNA-SMN1构建成功,其中pshRNA-SMN1-1组和pshRNA-SMN1-4组转染后明显抑制了hMSCs fl-SMN mRNA及蛋白的表达(均P＜0.05),在mRNA水平上千扰效率分别为64.05%、61.04%,蛋白水平上千扰效率分别为52.97%和61.57%,而未影响△7-SMN mRNA的表达.结论构建的pshRNA-SMN1重组质粒能有效地抑制人骨髓间充质干细胞fl-SMN mRNA及蛋白的表达.

作者：杨晓苏 ^[1] 胡益民 ^[2] 肖波 ^[1] 杨期东 ^[1] 谢瑛 ^[3]

作者单位：中南大学湘雅医院神经内科,长沙,410008 ^[1] 北京垂杨柳医院神经内科 ^[2] 北京电力医院神经内科 ^[3]

期刊：《中华医学杂志》2007年87卷33期 2369-2371页 MEDLINEISTICPKUCSCD

关键词：肌疾病,萎缩症 RNA干扰运动神经元生存基因间充质干细胞

主题词：间质干细胞(Mesenchymal Stem Cells)人(Persons)骨髓(Bone Marrow)基因表达(Gene Expression)研究(Research)

分类号： R6

栏目名称： 基础研究

DOI： 10.3760/j.issn:0376-2491.2007.33.018

发布时间： 2008-04-01

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被引：1
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