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α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞血红素氧化酶1基因表达及胞质游离钙水平的影响

Effect of α-zearalanol upon the expression of HO-1 gene and the cytosolic free calcium level in tumor necrosis factor α-stimulated human endothelial cell

摘要:

目的 探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血红素氧化酶I(HO-1)表达及胞质游离钙水平的影响及其作用机制.方法 用小分子RNA干扰(siRNA)技术消除HUVEC的NADPH氧化酶p47~(phox)亚基;用分子探针2,7-DCF测定细胞内活性氧(ROS)的产生量;用RT-PCR测定HO-1 mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定HO-1蛋白的表达;以Fluo-3/AM为探针,用激光共聚焦显微镜测定胞质游离钙整体水平的变化.结果 TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组增加了,155%(228.3±50.6比89.4±23.7,P<0.05);α-玉米赤霉醇预处理旱剂最依赖地抑制TNF-α对ROS的诱导效应;p47~(phox)的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生.TNF-α刺激使细胞内HO-1的mRNA表达水平较对照组增加了145%(0.88±0.10比0.36±0.11,P<0.01),蛋白的表达也明显增加;α-玉米赤霉醇预处理呈剂量依赖地抑制TNF-α对HO-1 mRNA表达的诱导效应;α-玉米赤霉醇预处理及转染p47~(phox)的siRNA均明显降低TNF-α诱导的HO-1蛋白的表达.TNF-α刺激使内皮细胞胞质游离钙整体水平比对照组增加179%(107.3±4.9比38.5±0.6,P<0.01);α-玉米赤霉醇预处理及转染p47~(phox)的siRNA分别使TNF-α诱导的胞质游离钙水平降低46%(58.5±0.3比107.3±4.9,P<0.01)及57%(46.3±2.1比107.3±4.9.P<0.01).结论 ROS仅部分介导TNF-α对HUVEC中HO-1表达的诱导作用,α-玉米赤霉醇主要通过抑制NADPH氧化酶途径产生的ROS而降低TNF-α诱导的HO-1表达及胞质游离钙水平增加.

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