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小干扰RNA沉默cox-2表达增强食管癌EC9706细胞的放射敏感性

Small interfering RNA in silencing cox-2 expression enhances radiosensitivity of esophageal cancer EC9706 cell

摘要:

目的 探讨环氧化酶(cox-2)基因的特异性小干扰RNA( siRNA)对食管癌EC9706细胞的放射增敏作用及机制.方法 构建针对cox-2基因的siRNA载体,通过脂质体转染技术将其转入食管癌EC9706细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株.0、2、4 Gy辐射处理,荧光定量RT-PCR检测细胞中cox-2、MMP2、Bax、Bcl-2的表达水平;Western印迹检测Cox-2蛋白及AKT蛋白和磷酸化AKT蛋白(pAKT)的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;克隆形成实验检测不同辐射处理对细胞增殖能力的影响.结果测序证实构建出针对cox-2基因的siRNA载体pRNA-U6.1-siCox214,RT-PCR和Western印迹结果显示其转染的食管癌EC9706细胞cox-2基因表达为有效沉默.0、2、4Gy辐射处理后,沉默cox-2基因表达的EC9706细胞中MMP2、Bcl-2 mRNA、AKT蛋白和磷酸化AKT表达水平均显著降低,且与照射剂量呈反比,Bax mRNA表达显著升高,且与照射剂量呈正比;cox-2沉默组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);cox-2沉默组细胞外侵袭穿透细胞数显著减少,差异有统计学意义(P<0.01).cox-2沉默组细胞在0、1、2、4、6、8、10 Gy照射后集落形成率均显著降低(P<0.01).结论 siRNA沉默cox-2基因表达可明显增强食管癌EC9706细胞的放射敏感性,可能与MMP2、Bax、Bcl-2、AKT蛋白和磷酸化AKT蛋白有关.

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