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人乳头瘤病毒18型E7多肽联合CpG制备疫苗及其体外效应研究

Preparation of HPV18 E7 peptide plus CpG vaccine and its immunologic effects in vitro

摘要:

目的 用SYFPEITHI数据库筛选针对HLA-A2的人乳头瘤病毒(HPV) 18 E7抗原表位多肽联合CpG制备HPV18疫苗.方法 (1)利用生物信息学平台预测和筛选HPV18 E7蛋白的HLA-A2抗原结合表位.(2)收集HLA -A2和HPV18阳性/阴性的病人/志愿者外周血和相应的肿瘤组织标本,并将这些标本随机分为7组:E7PA+ CpG、E7PB+ CpG、E7PC+ CpG、E7PD+ CpG、CpG、IR-T +CpG及对照组.利用MTT比色法检测各组不同时间段的T细胞增殖效应;利用乳酸脱氢酶( LDH)释放法检测人外周血淋巴细胞(PBMC)在不同效靶比下对肿瘤细胞的细胞毒活性;利用酶联免疫斑点测定法(ELISPOT)检测外周血中分泌IFN-γ的T细胞水平.结果 (1)筛选出一致性较高,特异性及亲和力较强,综合评分前4位的4段多肽作为研究对象,分别命名为E7PA,E7PB,E7PC,E7PD.(2)各实验组中T细胞较对照组增殖明显(P<0.05),在接种疫苗后不同时间点连续观察中以E7PA+ CpG组增殖效应最为突出;LDH释放实验示:效靶比为100∶1时,E7PA+ CpG组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),且效靶比呈明显的浓度依赖性.而除IR-T+ CpG组外其余各组较对照组差异有统计学意义(P<0.05),但组间差异无统计学意义;外周血中分泌IFN-γ的T细胞在E7PA组激活最明显,与对照组比差异有统计学意义(P<0.01);E7PA+ CpG组在HPV18阳性组中可引起大量的T细胞分泌IFN-γ,与其他组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 HPV18E7PA联合CpG可以在体外激活特异性的细胞免疫,是治疗HPV18相关疾病的有效靶点.

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