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脂肪因子chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响

Effects of chemerin on the proliferation of 3T3-L1 adipocytes

摘要:

目的 探讨脂肪因子chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响及可能机制.方法 制备小鼠chemerin过表达及RNA干扰重组慢病毒,感染3T3-L1细胞.实验设chemerin基因沉默组、沉默空载体对照组、过表达组、过表达空载体对照组.另在细胞增殖实验中增设细胞外信号调节激酶(ERK)阻断剂组.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法联合5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法观察chemerin对3T3-L1细胞增殖的影响;实时定量PCR检测chemerin、ERK1/2及细胞周期蛋白(cyclin)D1基因mRNA表达;Western印迹法检测chemerin、ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平.结果 MTT及BrdU掺入实验结果显示:与过表达对照组相比chemerin过表达后吸光度(A)值升高(1.09±0.08比0.90±0.09,P<0.05),BrdU掺入量增加[(126.5±14.6)%比(100.0±7.0)%,P<0.05],此效应可被ERK1/2信号通路阻滞剂PD98059抑制,A值(0.91±0.13)及BrdU掺入量(104.3±10.7)%降低,与过表达组相比差异均有统计学意义(均P <0.05);与沉默对照组相比,chemerin基因沉默后A值降低(0.72 ±0.11比0.90 ±0.09,P<0.05),BrdU掺入量减少[(77.6±11.8)%比(99.7±6.3)%,P<0.05];实时定量PCR结果显示:chemerin过表达后与其空载对照组相比chemerin、ERK1/2、cyclinD1表达上调(2.77 ±0.31比1.01 ±0.12,1.39±0.19比0.76±0.30,1.46±0.14比0.88±0.14,1.44±0.17比1.03±0.15,均P<0.05);chemerin基因沉默后均表达下调(0.35±0.12比1.25±0.31,0.64±0.15比1.03±0.14,0.56±0.10比1.06±0.29,0.66 ±0.13比1.09±0.19,均P<0.05);Western印迹结果显示:chemerin过表达后与其空载对照组相比chemerin、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平增加(2.18±0.32比1.18±0.14,1.37±0.05比0.97±0.12,1.06±0.09比0.56 ±0.08,均P<0.05),chemerin基因沉默后与其对照组相比chemerin、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平降低(1.00±0.07比1.40±0.17,0.87±0.15比1.20 ±0.12,0.49±0.07比0.91±0.11,均P<0.05).结论 chemerin可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,其机制可能是通过上调ERK1/2信号通路实现.

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