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人工合成小分子双链RNA通过激活P21蛋白对膀胱癌细胞生长的影响

Effect of synthetic small double-stranded RNA on the development of bladder cancer by activating P21 expression

摘要:

目的 通过转染人工合成的小分子双链RNA(dsRNA) dsP21-555至膀胱癌细胞系T24和EJ,观察其对膀胱癌细胞生长的作用.方法 根据对膀胱癌细胞的不同处理分为3组:阴性对照组[转染随机序列(dsControl)],阳性对照组(转染相应的微小RNA即miR-370)和实验组(转染dsP21-555).实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测3组细胞p21 mRNA及细胞周期依赖性激酶(CDK)4、CDK-6 mRNA的表达;Western印迹法检测P21蛋白和CDK4、CDK6蛋白的表达;流式细胞术测定转染后细胞周期分布;细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力.结果 qPCR结果显示,与转染dsControl相比,转染dsP21-555分别上调T24和EJ细胞中p21 mRNA表达至2.46倍(P<0.01)和2.60倍(P<0.01);转染dsP21-555与转染miR-370相比,p21 mRNA表达差异无统计学意义(均P>0.05).与转染dsControl相比,转染dsP21-555分别使T24和EJ细胞中CDK4 mRNA的表达下调43% (P <0.01)和54%(均P<0.01),CDK6 mRNA的表达下调39% (P<0.01)和36%(P<0.01);转染dsP21-555与转染miR-370相比,CDK4、CDK6 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).Western蛋白印迹检测结果验证了组间p21和CDK4、6基因表达的差异.流式细胞术检测显示,与转染dsControl相比,转染miR-370或dsP21-555后,G0/G1期细胞比例明显升高,而S期和G2/M期细胞比例减少,细胞周期被阻滞在G0/G1期.细胞增殖实验结果显示,与转染dsControl相比,转染miR-370或dsP21-555后细胞增殖能力明显下降(均P<0.05),且转染miR-370与转染dsP21-555间细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05).细胞集落形成实验显示,转染miR-370和dsP21-555形成的集落数量均较转染dsControl少.结论 dsP21-555能通过RNA激活作用激活P21蛋白的表达并显著抑制膀胱癌细胞的生长.

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