免疫荧光联合原位杂交技术检测骨肉瘤患者外周血中循环肿瘤细胞的表达及临床意义

Detection and clinical significance of circulating tumor cells in osteosarcoma using immunofluorescence combined with in situ hybridization

摘要:

目的 探讨骨肉瘤患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)的表达及其与患者预后的关系. 方法 采用活体细胞荧光示踪技术验证了免疫磁珠富集法回收细胞的能力,应用流式细胞术检测HOS细胞、HepG2细胞和人白细胞中CD45和CK18的表达,采用荧光原位杂交检测HOS细胞染色体倍数异常情况.采用免疫荧光联合原位杂交技术(iFISH)检测23例骨肉瘤患者中外周血CTCs,分析CTCs计数与患者预后的关系. 结果 免疫磁珠CD45差减富集法富集HOS细胞的回收率>90%.流式细胞术检测显示,HOS细胞呈CD45(-)和CK18(-).CEP8杂交探针信号>2的细胞占总细胞数的96.5%,其中探针信号数为3的细胞占异常细胞的65.0%.23例骨肉瘤患者中,19例患者外周血中检测到CTCs.复发和(或)转移患者CTCs计数为(2.846±1.281)个,无复发和转移患者的CTCs计数为(1.400±1.506)个,差异有统计学意义(P=0.021). 结论 利用iFISH可以检测到骨肉瘤患者外周血CTCs,且CTCs计数与患者的预后有关,CTCs可以作为骨肉瘤患者病情变化的预测指标.

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