蛋白激酶B1去类泛素化修饰抑制肝癌的增殖和转移

DeSUMOylation of protein kinase B1 inhibits cell proliferation and metastasis of hepatocellular carcinoma

摘要:

目的 探讨沉默泛素载体蛋白9(Ubc9)基因表达诱导蛋白激酶B1(AKT1)去类泛素化修饰,及其对肝癌细胞增殖和转移的影响.方法 利用RNA干扰技术沉默HepG2肝癌细胞Ubc9基因表达,Western blot法检测Ubc9、小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)和蛋白激酶B1(AKT1)蛋白表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测HepG2细胞增殖活性,细胞划痕实验和Transwell方法检测细胞迁移能力.建立荷瘤鼠模型,测量肿瘤体积并绘制生长曲线,解剖肿瘤组织并称重比较.采用原位细胞凋亡实验检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和 MMP-9的表达情况.结果 siR-Ubc9基因转染可使HepG2细胞中Ubc9、共轭SUMO1、游离SUMO1和AKT1蛋白水平均明显下降(均P<0.05).对照组、siR-neg组和siR-Ubc9组的细胞增殖指数分别为53.19%、54.25%和39.17%,细胞迁移距离分别为(59.47±4.66)μm、(56.56±5.37)μm和(34.57±6.61)μm,发生迁移的细胞数量分别为(89.44±8.36)个/视野、(93.84±8.79)个/视野和(41.67±5.39)个/视野,siR-Ubc9组与对照组和siR-neg组差异均有统计学意义(均P<0.05).对照组、siR-neg组和siR-Ubc9组的皮下肿瘤重量分别为(3.78±0.69)g、(3.72± 0.72)g和(2.09±0.61)g,细胞凋亡率分别为(7.79±2.21)%、(6.45±2.48)%,和(33.59±5.44)%,siR-Ubc9组与对照组和siR-neg组差异均有统计学意义(均P<0.05).对照组和siR-neg组肿瘤组织中PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白均高表达,而siR-Ubc9组肿瘤组织中PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达均低表达,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 通过沉默肝癌细胞中Ubc9基因表达能够诱导AKT1去SUMO化修饰,进而抑制肝癌细胞的增殖和转移,为未来肝癌基因治疗提供了新的借鉴方法.

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