海参糖胺聚糖联合顺铂对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及化疗增敏的作用机制

The roles of holothurian glycosaminoglycan combined with cisplatin on proliferation and chemotherapeutic response in A549 human lung adenocarcinoma cell

摘要:

目的 探讨海参糖胺聚糖(hGAG)与顺铂(DDP)单独或联合应用对人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及 hGAG对 DDP 化疗的增敏机制.方法 将对数生长期的 A549细胞分为hGAG组、DDP组、hGAG和DDP联合组(联合组)以及对照组.倒置相差显微镜观察细胞的生长状态和形态变化,CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率,Hoechst 33258染色、annexinV-FITC和PI双染法检测细胞的凋亡情况,Western blot检测各组凋亡蛋白Bcl-2、Bax、survivin和caspase-3的表达.结果CCK-8检测结果显示,处理24 h后,hGAG组、DDP组、联合组和对照组A549细胞的增殖抑制率分别为(19.74±5.39)%、(42.01±2.57)%、(53.89±4.58)%和0;处理48 h后,分别为(23.17±4.78)%、(54.00± 7.64)%、(77.58±4.26)%和0;处理72 h后,分别为(29.17±4.21)%、(59.35±7.31)%、(79.94±4.58)%和0;同一时间hGAG组、DDP组和联合组A549细胞的增殖抑制率均高于对照组(均P<0.05),联合组A549细胞的增殖抑制率均高于DDP组(均P<0.05).Hochest 33258染色结果显示,对照组未见凋亡细胞,hGAG组、DDP组和联合组均可见凋亡细胞,其中联合组凋亡细胞数最多,且细胞密度最低.流式细胞术检测结果显示,hGAG 组、DDP 组、联合组和对照组细胞中早、中期细胞凋亡率分别为(12.59±4.22)%、(16.36±3.63)%、(44.60±5.45)%和(2.38±0.59)%,hGAG组、DDP 组和联合组的细胞凋亡率均高于对照组(均P<0.05),联合组高于DDP 组(P<0.05).Western blot检测显示,与对照组比较,hGAG组、DDP组和联合组细胞中Bax和caspase-3蛋白的表达均增高(均P<0.05),联合组细胞中Bax和caspase-3蛋白的表达均高于DDP组(均P<0.05);而Bcl-2和survivin蛋白的表达均降低(均P<0.05),且联合组中Bcl-2和survivin蛋白的表达均低于DDP组(均P<0.05).结论 hGAG对人肺腺癌A549细胞的增殖具有抑制作用,且可增强A549细胞对DDP化疗的敏感性,其作用机制可能与上调Bax和caspase-3蛋白的表达以及下调Bcl-2和survivin蛋白的表达有关.

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