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胰腺癌耐药细胞株JF305/CDDP和PANC-1/GEM的生物学特性及新耐药相关基因MSX2的发现

A novel chemo-resistant gene MSX2 discovered by establishment of two pancreatic cancer drug resistant cell lines JF305/CDDP and PANC-1/GEM

摘要:

目的 建立胰腺癌耐药细胞株,探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制.方法 采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)及交叉耐药情况,并观察其生长差异.应用流式细胞术检测耐药细胞的周期变化,Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中多药耐药相关基因的变化.结果 成功获得对CDDP耐药的细胞株JF305/CDDP和对GEM耐药的细胞株PANC-1/GEM.JF305/CDDP和PANC-1/GEM细胞株的耐药指数分别为15.3和27.31,并存在交叉耐药.与亲代细胞相比,JF305/CDDP细胞的生长增殖速度减慢,第4天时吸光度(A)值分别为0.60±0.01和1.00±0.06(P=0.002);JF305/CDDP细胞的G1+G2期细胞比例增加[(70±3)%和(55±3)%],而S期细胞比例减少[(30±2)%和(45±2)%,P=0.041];JF305/CDDP细胞穿过Transwell小室的数量增加[(158±5)个/视野和(32±1)个/视野,P<0.001];JF305/CDDP细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)和同源(异型)框基因2(MSX2)的表达量增加到(5.10±0.63)倍、(7.20±0.84)倍和(6.95±0.77倍).在JF305细胞中,敲降MSX2则MRP2表达降低(0.69±0.17);在PANC-1细胞中,过表达MSX2则MRP2表达升高(2.1±0.31).结论 成功建立了2株稳定的耐药胰腺癌细胞株JF305/CDDP和PANC-1/GEM.发现了新的耐药相关基因MSX2,MSX2可能通过上调MRP2的表达促进胰腺癌细胞耐药.

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