换一批lncRNA CRNDE调控miR-29a-3p对LPS诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡影响的分子机制研究
Molecular mechanism of lncRNA CRNDE regulating miR-29a-3p on LPS-induced proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells
摘要目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:将HUVECs分为对照组(细胞正常培养)、LPS组(细胞用1.0 μg·ml-1的LPS诱导24 h)、si-NC+ LPS组(用1.0 μg·ml-1 LPS诱导转染si-NC的细胞24 h)、si-CRNDE+ LPS组(用1.0 μg·ml-1 LPS诱导转染si-CRNDE的细胞24 h)、miR-NC+LPS组(用1.0 μg·ml-1 LPS诱导转染miR-NC的细胞24 h)、miR-29a-3p+ LPS组(用1.0 μg·ml-1LPS诱导转染miR-29a-3p mimics的细胞24 h)、anti-miR-NC+si-CRNDE+LPS组(用1.0 μg·ml-1 LPS诱导共转染anti-miR-NC与si-CRNDE的细胞24 h)和anti-miR-29a-3p+ si-CRNDE+ LPS组(用1.0 μg·ml-1 LPS诱导共转染anti-miR-29a-3p与si-CRNDE的细胞24 h).实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中CRNDE和miR-29a-3p表达,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞仪和蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、凋亡及细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)表达.双荧光素酶报告基因实验验证CRNDE与miR-29a-3p调控关系.结果:与对照组比较,LPS组HUVECs中CRNDE表达升高(P＜0.05),而miR-29a-3p表达降低(P＜0.05).与si-NC+LPS组比较,si-CRNDE+LPS组HUVECs存活率和CyclinD1表达升高(P＜0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3表达降低(P＜0.05).与miR-NC+ LPS组比较,miR-29a-3p+ LPS组HUVECs存活率和CyclinD1表达升高(P＜0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3表达降低(P＜0.05).CRNDE靶向负调控miR-29a-3p.与anti-miR-NC+si-CRNDE+LPS组比较,anti-miR-29a-3p+ si-CRNDE+ LPS组HUVECs存活率和CyclinD1表达降低(P＜0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3表达升高(P＜0.05).结论:低表达CRNDE可抑制LPS处理的内皮细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其作用机制与负调控miR-29a-3p表达有关.
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