换一批维甲酸X受体对缺氧/复氧诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的调控作用
Role of retinoic acid X receptor in regulation of autophagy in rat alveo?lar type Ⅱepithelial cells induced by hypoxia/reoxygenation
摘要目的:探讨维甲酸X受体(RXR)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)自噬的调控作用及分子机制.方法:常氧培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,将生长至对数生长期的细胞随机分为5组:(1)对照组:细胞于正常条件下培养30 h;(2)缺氧/复氧组:细胞缺氧6 h,复氧24 h;(3)溶剂DMSO组:细胞于造模前1.5 h用浓度低于0.1％的DMSO进行预处理,其余处理同H/R组;(4)9-顺式维甲酸(9-RA)组:细胞于缺氧前1 h用9-RA(100 nmol/L)预处理;(5)HX531组:细胞先用9-RA处理0.5 h,然后用HX531(2.5μmol/L)处理1 h.采用CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光染色法观察各组细胞RXRα表达变化;用透射电镜观察细胞内部超微结构的改变;RT-PCR检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、自噬相关蛋白beclin 1及LC3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和P62 mRNA水平的表达.Western blot检测p-AMPK、beclin 1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62蛋白的表达.结果:与对照组相比,其余4组细胞的细胞活力显著降低,AMPK、beclin 1和LC3 mRNA表达显著增多,p-AMPK、beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白表达显著增多,而mTOR和P62 mRNA表达降低,p-mTOR和P62蛋白表达降低(P<0.05);与缺氧/复氧和HX531组相比,9-RA组细胞损伤减轻,自噬水平也显著降低(P<0.05).结论:(1)缺氧/复氧可诱导AECⅡ自噬水平升高;(2)激活RXR可一定程度上减轻缺氧/复氧引起的AECⅡ损伤,其机制可能与抑制细胞自噬有关.
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DOI
10.3969/j.issn.1000-4718.2020.10.014
发布时间
2020-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
温州市公益性科技计划（No.2017Y0223）
温州市引进国外专家智力资助项目（No.Z2015-68）
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