换一批T细胞人类白细胞抗原-G过表达对T细胞共培养胃癌MGC-803细胞的免疫杀伤作用
Immune killing effect of HLA-G over expression on co-cultured gastric cancer MGC-803 cells
摘要目的 研究T细胞人类白细胞抗原-G(HLA-G)过表达后对共培养胃癌MGC-803细胞的免疫杀伤作用.方法 处死各组小鼠后分离淋巴细胞,通过免疫磁珠纯化T淋巴细胞,其纯度用流式细胞仪测定.将转染试剂、NC质粒、HLA-G重组载体分别转染至T淋巴细胞分为对照(Control)组、NC转染组、HLA-G转染组,细胞转染效率用荧光显微镜和流式细胞仪测定.以蛋白质印迹(WB)法测定各组细胞中HLA-G蛋白表达水平;以酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组细胞上清液中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;转染48 h后以CCK-8法检测HLA-G转染组、NC转染组、Control组与胃癌MGC-803细胞共培养时肿瘤免疫杀伤效率.结果 HLA-G转染组细胞中HLA-G蛋白表达(1.08±0.09)明显高于Control组(0.18±0.04)和NC转染组(0.17±0.05,P<0.05).与Control组、NC转染组相比,HLA-G转染组细胞中IFN-γ、IL-2、TNF-α水平均明显降低(均P<0.05).效靶比为10:1、20:1、40:1时,与Control组、NC转染组相比,HLA-G转染组胃癌细胞免疫杀伤率均显著降低(P<0.05).结论 T细胞过表达HLA-G后可减弱对胃癌细胞MGC-803体外免疫作用,当效靶比为40:1时,T细胞对胃癌细胞MGC-803免疫杀伤作用最显著.
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