检索历史 清除

摘要目的：人乳头瘤病毒16型（HPV16）E2蛋白是HPV16病毒基因编码的早期蛋白，是诱导HPV16感染的宫颈癌细胞发生细胞凋亡的重要分子。然而，目前研究对于E2蛋白诱导宫颈癌细胞凋亡有关的具体片段知之甚少。本课题将分析鉴定HPV16 E2蛋白与诱导宿主细胞凋亡有关片段并分析其诱导宫颈癌细胞凋亡的分子机制，为宫颈癌的免疫治疗寻找新的分子靶点。<br>　　方法：（1）将目的基因HPV16E2、HPV16NE2和HPV16HCE2构建到真核表达载体pEF1-Myc-6His-C上；（2）运用脂质体转染技术将重组质粒pEF1-E2-Myc-6His、pEF1-NE2-Myc-6His和pEF1-HCE2-Myc-6His及空载质粒pEF1-Myc-6His-C分别瞬时转染至宫颈癌细胞系Caski细胞中，并通过Western Blotting方法检测各目的基因在Caski细胞中的表达情况；（3）用MTT法检测分别瞬时转染pEF1-E2组、pEF1-NE2组和pEF1-HCE2组与阴性对照组（即空载组pEF1-C）相比较Caski细胞的细胞增殖情况；（4）用Western Blotting检测各组Caski细胞中凋亡相关蛋白Cleaved-PAPR的表达情况；并用AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒与流式细胞仪检测各组Caski细胞凋亡情况。<br>　　结果：(1)成功构建真核表达重组质粒pEF1-E2-Myc-6His、pEF1-NE2-Myc-6His和pEF1-HCE2-Myc-6His；（2）带有Myc标签的HPV16E2、HPV16NE2及HPV6HCE2融合蛋白在宫颈癌细胞系Caski细胞中成功表达；(3) MTT法检测Caski细胞的增殖情况显示：与阴性对照组（空载组pEF1-C）相比较，瞬时转染pEF1-NE2组和pEF1-HCE2组的Caski细胞的细胞增殖情况在培养24h、48h、72h和96h均无明显统计学差异（p>0.05）；瞬时转染pEF1-E2组在培养24h细胞增殖无明显统计学差异（p>0.05),而在培养48h细胞增殖较阴性对照组细胞受抑制（p=0.028<0.05），72h和96h细胞增殖明显受抑制（p<0.01）；（4）Western Blotting结果显示pEF1-E2组细胞凋亡相关蛋白Cleaved-PARP的表达量较高，而pEF1-NE2组和pEF1-HCE2组中细胞凋亡相关蛋白Cleaved-PARP则无明显表达；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测结果显示，与空白对照组及阴性对照组相比较，pEF1-E2组细胞凋亡情况较明显，而pEF1-NE2及PEF1-HCE2组较对照组无明显差异。<br>　　结论：HPV16E2蛋白全长可诱导宫颈癌Caski细胞发生细胞凋亡，但仅N端或HC端E2蛋白难以诱导其发生细胞凋亡，进一步的研究了HPV16 E2蛋白诱导宫颈癌细胞凋亡的分子机制，这一研究结果对进一步探究宫颈癌免疫治疗的分子靶点具有一定的潜在价值。