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摘要目的：<br>　　近年来，基因治疗的发展非常迅速。RNA干扰（RNA interference， RNAi）是基因治疗中最重要的发现之一，在治疗肿瘤和病毒感染方面具有很大的使用潜力，得到了人们的广泛关注。但是RNAi本身的一些理化性质限制了小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）的应用，稳定性较差，易被生物体内的核酸酶降解，降低了 siRNA的应用效率；并且siRNA分子量较大，具有亲水性和负电性，这些都影响了 siRNA的跨膜转运效果。因此，如何能够将 siRNA成功地转运至细胞质中并发挥治疗效果成为人们研究的热点。<br>　　在siRNA的应用研究中，一个重要的目的就是能够使siRNA成功穿透细胞膜，进入到细胞质中发挥疗效。因此，细胞穿膜肽（cell-penetrating peptides，CPPs）引起了人们的关注。细胞穿膜肽是由5-30个氨基酸按照一定的顺序组成的两性或阳性的短肽链。它能够高效地穿过细胞膜，且能够介导其它生物大分子（比如siRNA）进入细胞质中，是目前研究较热的药物载体。<br>　　本研究选用了具有类似穿膜肽性质的八聚组氨酸（H8），它是由8个组氨酸分子反应生成的一种阳性短肽，为了提高 H8的穿膜效率，将 H8与疏水基团（硬脂酸，SA）反应，合成 SA-H8和 SA-H8-PEG2000两种阳性载体，将合成的载体通过静电作用与 siRNA结合，组成SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA纳米复合物。通过测定纳米复合物的电位、粒径、凝胶阻滞能力考察 SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA的理化性质，筛选出了SA-H8-PEG2000/<br>　　siRNA和 SA-H8-PEG2000n/siRNA的最佳处方配比。以 MCF-7细胞和A549细胞为模型，考察载体与细胞之间的相互作用，评价细胞对载体药物的摄取效率。<br>　　方法：<br>　　通过查阅文献和试验探索，确定了SA-H8和SA-H8-PEG2000两种阳性载体材料的合成和纯化方法。将SA和H8在室温条件下搅拌反应1 h，用纯净水进行透析纯化，直接冻干备用，即得目的产物SA-H8。将SA-H8与mPEG2000-Mal溶液混合，避光反应48 h，用纯净水透析纯化，即得产物SA-H8-PEG2000。<br>　　以制剂的粒径、电位和琼脂糖凝胶电泳行为为指标，考察制剂的理化性质，筛选出最佳处方配比。<br>　　选择 MCF-7细胞和 A549细胞为细胞模型，以流式细胞分析的方法测定细胞的荧光强度，通过荧光强度的强弱来判定细胞的摄取效率，以评价载体对siRNA的转染效率的贡献。<br>　　结果：<br>　　将合成的产物进行质谱分析，结果显示合成得到 SA-H8和SA-H8-PEG2000两种共轭物。<br>　　以 siRNA作为模型效应分子，通过室温涡旋孵育的方法得到SA-H8-PEG200020％/siRNA、SA-H8-PEG200050%/siRNA和SA-H8-PEG2000/siRNA纳米复合物。通过测定电位、粒径以及凝胶阻滞试验得到了纳米复合物的理化性质。SA-H8-PEG200020%/siRNA处方粒径在200nm-700nm之间，且随着N/P比的增加而变大。从琼脂糖凝胶电泳的结果可以分析得到，当N/P比为80时，仍然能够看到清晰的条带，说明siRNA未被完全包载，SA-H8-PEG200020%对siRNA的包载能力较差。SA-H8-PEG2000的比例提高至50%之后， SA-H8-PEG200050%/siRNA处方粒径在350nm-450nm之间。N/P比为80时， siRNA被完全包载。SA-H8-PEG2000/siRNA处方粒径在300nm-400nm之间，且粒度分布相对均匀，当N/P比大于或等于40时，实现siRNA的完全包载。综上所述，选择SA-H8-PEG200050%/siRNA80:1和SA-H8-PEG2000/siRNA80:1作为最终处方。<br>　　由流式细胞分析的结果可知：在 A549与 MCF-7细胞中， SA-H8-PEG200050%/siRNA和 SA-H8-PEG2000/siRNA的细胞摄取率都随着时间的推移而增大，呈现明显的时间依赖性。SA-H8-PEG200050%/siRNA和 SA-H8-PEG2000/siRNA两种载体形式的细胞摄取率明显高于游离siRNA，但与市售制剂仍存在一定差距。<br>　　结论：<br>　　本研究所构建的载体可以有效包载 siRNA并显著提高其细胞摄取水平。然而，为达到市售制剂的转染能力，仍有必要对载体的处方、制备工艺进一步优化和筛选。