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摘要【研究背景和目的】<br>　　阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease，AD）是最常见的老年痴呆类型。AD发病的病理核心是老年斑中β样淀粉样蛋白（β-amyloid，Aβ）的沉积，神经元纤维缠结（NFTs），大脑皮层和海马区突触联系缺失等。Aβ由淀粉样蛋白前体（Amyloid precursor protein，APP）经β-分泌酶（BACE1)和γ-分泌酶酶切后生成。Aβ易聚集形成寡聚体、纤维化、沉积为粥样斑块，对神经元造成损害，因此抑制Aβ的生成是治疗AD的关键。目前临床上AD的治疗主要是胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂等改善症状的药物，尚无特异性针对病因、预防和阻滞病情进展的药物。姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取的黄色色素，具有抗淀粉样变、抗炎、抗氧化及抑制胆碱酯酶活性等作用。体外及体内的实验证实姜黄素可以显著降低Aβ的量，抑制Aβ的聚集、纤维化和斑块形成。然而目前AD的研究中使用的大多是姜黄素复合物，其包含姜黄素（Cur）、去甲氧基姜黄素（DMC）和双去甲氧基姜黄素（BDMC）三种单体，并且有研究提出姜黄素单体Cur抑制Aβ生成的作用较姜黄素复合物及余单体明显，但姜黄素单体Cur抑制Aβ的机制尚不清楚。微小核糖核酸（microRNAs，miRNAs）是一类非编码的内源性小分子RNA，通过和靶基因mRNA碱基配对阻碍其翻译及降解。据报道miRNAs可参与神经变性疾病的病理过程，能靶向于AD相关基因的3’非翻译区（3’ UTR）使其翻译产物的表达受抑制。然而在AD研究中尚无姜黄素单体通过调控APP基因特异的miRNAs而影响其靶基因产物的表达的报道。因此,本课题的研究目的是：研究姜黄素单体对swAPP HEK293细胞Aβ生成的影响及可能的初步机制，为姜黄素单体的进一步应用提供实验依据。<br>　　【实验方法】<br>　　设定姜黄素单体Cur的浓度梯度（2、5、10、20、40μM）作用于swAPP HEK293细胞各时间点（6、12、24h）后，采用MTT法（MTT比色法）检测细胞存活及生长，ELISA法（酶联免疫吸附试验）检测Aβ40和Aβ42的水平，筛选出姜黄素的最佳作用浓度及时间点；用RT-PCR（聚合酶链式反应）检测APPmRNA的表达，Western blot法（聚丙烯酰胺凝胶电泳）检测APP蛋白的表达，qRT-PCR（实时荧光定量多聚酶链反应）检测miRNA的表达。<br>　　【研究结果】<br>　　1、与对照组相比，浓度≤5μM的Cur对细胞活性无明显影响，而浓度≥10μM的姜黄素对细胞有毒性作用；<br>　　2、浓度为5μM的Cur作用细胞24h后明显抑制细胞内Aβ40和Aβ42的生成，较各对照组差异有统计学意义；<br>　　3、Cur对APP mRNA的表达无明显影响，但明显抑制APP蛋白的表达，与对照组相比差异有统计学意义；<br>　　4、Cur使miR-153的表达上调，使miR-101的表达下调，与对照组相比差异有统计学意义，而对miR-195的表达无明显影响。<br>　　5、miR-153对APP mRNA的表达无明显影响，可在转录后水平负性调控APP蛋白的表达，与对照组相比差异有统计学意义。<br>　　【结论】<br>　　1、Cur的浓度及时间为5μM、24h时，对swAPP HEK293细胞中Aβ40和Aβ42生成的抑制作用最明显；<br>　　2、Cur可在转录后水平抑制APP蛋白的表达从而抑制Aβ40及Aβ42的生成；<br>　　3、Cur可能通过诱导miR-153过表达在转录后水平抑制APP蛋白的表达，从而抑制Aβ40、Aβ42的生成。