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摘要第一部分：SYB对肝癌细胞增殖的影响。<br>　　目的：研究红花黄色素B对肝癌细胞生长增殖的影响。<br>　　方法：通过CCK-8法检测不同浓度的SYB对HepG2细胞增殖的影响。分别用终浓度为50，100，150，200nmol/mlSYB,分别培养12h，24h,36 h和48h。用CCK-8计算细胞的生长率。采用Annexin V/P I流式细胞分析法进行了凋亡率的定量研究，检测H epG2细胞经0、50nmol/ml、100nmol/ml、150nmol/mK及200nmol/ml处理后的调亡率。<br>　　结果：随着S Y B作用时间的增长，HepG2细胞的增长率逐渐变化，当S Y B的浓度为150nmol/ml、在作用36h时，HepG2细胞的的生长情况最差。在HepG2凋亡率中，S Y B O组与其它各组比较，有显著性差异;晚期凋亡率中，当S Y B的浓度为150nmol/ml、及200 n m o l/m l时与空白对照组差异显著，呈剂量依赖关系。<br>　　结论：S Y B可以抑制HepG2细胞生长、抑制HepG2细胞增殖活性、诱导肿瘤细胞凋亡。<br>　　第二部分：SYB作用后miR34a在肝癌细胞HepG2中的表达。<br>　　目的:寻找SYB作用后miRNA中变化较为剧烈的miRNA而后对其表达情况进行研究分析。<br>　　方法：使用浓度为150mnol/mlSYB作用于肝癌细胞HepG2后，基因芯片检测miRNA表达的变化。然后用定量PCR对此miRNA表达进行研究。<br>　　结果：受S Y B影响的m iR N A有19个，其中miR-34a变化最明显。与Omin的表达量相比，在20min、40min和60min的miR-34a在mRNA水平上的表达量均显著增高（P＜0.05)，而在40 m in和60 m in的miR-34a在m R N A水平上的表达量则明显髙于20 m in的表达量（P＜0.05)，而40min和60min的miR-34a在mRNA水平上的表达量则没有明显差别(P＞0.05)o<br>　　结论：在S Y B作用40m in后，miR-34a在m R N A水平上的表达量已经达到最佳状态。<br>　　第三部分：S Y B作用后p53，caspase-9及相关蛋白在肝癌细胞H epG2中的表达。<br>　　目的：SYB作用于肝癌细胞HepG2后细胞内p53及线粒体途径的蛋白表达情况进行初步研究。<br>　　方法：用Western blot的方法对p53，caspase3(剪切后），caspase9，caspase8, Bcl-2的表达量进行分析，同时对条带灰度值进行分析。<br>　　结果：随着S Y B作用时间的增加，Bcl-2的表达量逐渐降低，20min的Bcl-2的表达量与Omin相比，没有明显差别（P＞0.05)。而40min和60m in的Bcl-2的表达量与Omin相比，结果显著降低(P＜0.05)，与20min的Bcl-2的表达量相比同样显著降低（P＜0.05)。而40m in和60m in的Bcl-2的表达量没有显著差异（P＞0.05)。而p53，caspase3(剪切后）， caspase8，caspase9的表达量逐渐升高。20min、40min和60min的p53的表达量与Omin相比，结果显著升高（P＜0.05)，40min和60min与20min的p53的表达量相比同样显著增高（P＜0.05)。而40min和60min的p53的表达量没有显著差异（P＞0.05)。<br>　　结论：S Y B可以诱导HepG2细胞凋亡，其基本原理可能通过以下途径：SYB可以增强p53基因的转录水平，从而激活下游的Bax基因转录，抑制了 Bcl-2基因的转录，使p53蛋白和Bax蛋白的表达量增高;Bcl-2蛋白的表达量下降，其基本原理是p53蛋白和Bcl-2蛋白结合了，或是B cl-2自身形成了二聚体，使其的特异性孔道开放，释放出细胞色素C，从而导致caspase的级联反应，导致细胞调亡。<br>　　第四部分：p53抑制后m iR34 a和caspase9及其相关蛋白表达的变化。<br>　　目的：p53在此过程中对m iR-34a的作用，及其他相关蛋白表达的影响进行研究。<br>　　方法：用150mn的p53抑制剂作用于肝癌细胞HepG2后12h，用终浓度为150nmol/l的SYB作用于肝癌细胞HepG2，并与作用0，20min,40min和60min收集细胞，检测miRNA，做Western实验。并检测SYB组，SYB加p53抑制剂组，和不加SYB组的细胞增殖情况。<br>　　结果：加入p53抑制剂后miR34a在mRNA水平上在各个时间段的表达量几乎没有变化，差异不显著（P＞0.05)。与相应时间段的只加S Y B的对照组相比，表达量明显降低（P＞0.05)。p53, caspase3(剪切后），caspase9，caspase8，Bcl-2的表达量均没有明显变化。随着作用时间的增加，肝癌细胞HepG2的增殖率也在增加，在24h，36h和48h的细胞增殖百分比显著高于12 h的（P＜0.05)，36 h和48 h的细胞增殖百分比显著髙于24h的（P＜0.05)，而在36h和48h的细胞增殖百分比则无明显变化（P＞0.05)。<br>　　结论：p53对m iR34a的表达量有控制作用。<br>　　第五部分：m iR34 a抑制后p53和caspase9及其相关蛋白表达的变化。<br>　　目的：当m iR34 a抑制后，p53和caspase9及其相关蛋白表达的变化进行研究。方法：用RNA干扰的方法将miR34a抑制后，westernblot检测了 p53, caspase3(剪切后），caspase9，caspase8，Bcl-2的表达量，cck-8检测了 HepG2的增殖情况。<br>　　结果：当miR34a抑制后，随着SYB作用时间的增加，Bcl-2的条带逐渐变浅，20m in的Bcl-2的表达量与Omin相比，没有明显变化(P＞0.05)o而40min和60min的Bcl-2的表达量与Omin相比，显著降低（P＜0.05)，与20m in的Bcl-2的表达量相比同样显著降低（P＜0.05)。而40min和60min的Bcl-2的表达量没有显著差异（P＞0.05)。caspase8的表达量在20m in的caspase8的表达量与Omin相比，没有明显变化(P＞0.05)。而40min和60min的caspase8的表达量与Omin相比，显著升髙（P＜0.05)，与20m in的caspase8的表达量相比同样显著升高(P＜0.05)o在20min，40min和60min的caspase3(剪切后），caspase9的表达量与Omin相比，显著升高（P＜0.05)，40min和60min与20min的caspase3(剪切后），caspase9的表达量相比同样显著增高（P＜0.05)。而40min和60min的caspase3(剪切后），caspase8，caspase9的表达量没有显著差异（P＞0.05)。肝癌细胞H epG2的增殖率也在增加，在24h,36 h和48 h的细胞增殖百分比显著高于12 h的（P＜0.05)，36 h和48h的细胞增殖百分比显著髙于24h的（P＜0.05)，而在36h和48h的细胞增殖百分比则无明显变化（P＞0.05)。<br>　　结论：miR-34a通过对Bcl-2的调控实现了对细胞凋亡的调控。