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消癌平对肝癌细胞侵袭转移的体内外实验研究

摘要:

目的:原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)是我国常见恶性肿瘤之一,死亡率居我国恶性肿瘤的第二位。当前治疗原发性肝癌的首选方法是手术切除,然而有资料表明,肝癌术后3年复发、转移率高达57%-81%,严重威胁着人们的生命健康。因此,寻求有效抑制侵袭转移与复发已成为当今肝癌研究的重点和难点。中药消癌平为临床常用的抗癌药物,有高效低毒的特点,能有效抑制多种肿瘤的生长,延长患者的生存期并有效改善生存质量。本实验通过观察消癌平在体内外实验中对肝癌细胞侵袭转移的影响,探讨其可能的抗侵袭转移机制,为临床应用提供实验依据。<br>   方法:<br>   1.细胞水平:细胞采用传代培养。分别将低、中、高剂量(10mg/mL、30mg/mL、50mg/mL)的消癌平与Hepa1-6 肝癌细胞共同培养,MTT 法检测药物处理后细胞的活性,细胞划痕实验检测细胞的移动能力。2.动物水平:构建小鼠肝癌荷瘤模型,随机分为5组,每组15只。消癌平低、中、高剂量组分别给予消癌平注射液10g/(kg·d)、20g/(kg·d)、40g/(kg·d);阳性对照组给予5-Fu 20mg/(kg·d);阴性对照组给予等体积无菌生理盐水;均连续腹腔给药14天。称瘤重、脾重分别计算抑瘤率和脾指数;ELISA 法检测血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平。<br>   结果:<br>   1.细胞水平:<br>   1.1光镜下观察:不同剂量的消癌平孵育Hepa1-6细胞后,细胞表现为不同程度的:伪足回缩、变圆,细胞分裂相减少,瘤巨细胞减少,部分细胞出现悬浮,随药物剂量增加上述表现越明显;对照组细胞形态多不规则,有较长的伪足,核分裂相多见。1.2 MTT 示:不同剂量的消癌平对小鼠肝癌Hepa1-6细胞的生长均有抑制作用,呈剂量、时间依赖性;各给药组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),组间比较差异显著(P<0.05)。1.3细胞划痕实验:不同剂量的消癌平能够有效地阻止细胞向划痕处生长,且铺满划痕所需要的时间随消癌平剂量的增加而延长。<br>   2.动物水平:<br>   2.1脾指数:与阴性对照组相比,消癌平各剂量组脾指数明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);而阳性对照组无明显差异(P>0.05)。2.2 抑瘤率:消癌平注射液对H22 荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用,低、中、高剂量组抑瘤率分别为:20.7%,31.6%,38.63%;与阴性对照组平均瘤重相比,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.3 血清sICAM-1的表达:消癌平低、中、高剂量组的分泌量分别为:53.26±9.36ng/L,35.75±11.16ng/L,29.13±8.52ng/L;与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);与正常小鼠相比,各组差异有统计学意义(P<0.05)。<br>   结论:消癌平可能通过抑制肝癌细胞的增殖及运动能力,降低血清中sICAM-1的表达达到抑制肿瘤的转移的目的。

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