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鼠白细胞介素10重组腺病毒在RINM5F细胞的表达及生物活性

摘要目的:了解腺病毒载体转染鼠白细胞介素10(IL-10)基因对体外培养的胰岛细胞的作用,探索基因治疗在胰岛移植中的潜在应用价值。 方法:自鼠脾细胞克隆IL-10CDNA,构建携带有IL-10基因的重组腺病毒载体并感染RINm5F细胞,ELISA检测IL-10基因表达,检测培养上清中NO水平,胰岛素释放实验进行功能测定,流式细胞检测细胞凋亡。 结果:经限制性内切酶检测和GFP表达证实成功地构建了携带有IL-10基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒,病毒滴度为5.5×108pfu/ml。IL-10蛋白有效表达,并具有抑制STZ诱导胰岛β细胞凋亡、保护细胞胰岛素分泌的功能。 结论:成功地构建了携带IL-10基因的重组腺病毒载体,并能有效表表达,可增强胰岛细胞的抗凋亡能力为进一步研究IL-10基因临床应用奠定了基础。

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