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摘要目的:构建分子嵌合造血干细胞,体外探讨它对T细胞增殖能力的影响,为研究分子嵌合诱导移植免疫耐受奠定基础。<br>　　 方法:①采用RT-PCR方法获取供体C57BL/6小鼠MHC-Ⅰ基因H-2Db,通过双酶切、定向克隆技术将H-2Db亚克隆入逆转录病毒表达质粒pMSCVneo,通过Lipofectamine2000与辅助质粒共转染293T细胞以获得携带H-2Db基因的重组逆转录病毒。②应用淋巴细胞分离液密度梯度分离法分选受体BALB/c小鼠骨髓造血干细胞。③将携带H-2Db的逆转录病毒转染造血干细胞并优化转染条件,同时设置未转染组,转染空质粒组；以荧光实时定量PCR和流式细胞术分别在mRNA水平和蛋白水平检测转染后各组造血干细胞H-2Db表达情况。④受体BALB/c小鼠输注造血干细胞后7天,取脾细胞做为反应细胞,与来自供体C57BL/6小鼠脾细胞的刺激细胞行单向混合淋巴细胞培养,MTT法检测各组T细胞增殖情况。<br>　　 结果:①成功获取H-2Db基因,构建的质粒pMSCVneo-H-2Db经限制性双酶切检测和测序分析,结果表明质粒构建成功。②质粒pMSCVneo-H-2Db经包装后,获得了携带H-2Db基因的逆转录病毒颗粒。③成功体外分选及培养受体BALB/c小鼠骨髓造血干细胞,经流式细胞术检测CD34阳性细胞可达(35.60±2.19)％。④与未转染组和转染空质粒组相比,转染构建质粒组H-2Db基因mRNA水平和蛋白水平表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)；而未转染组与转染空质粒组之间差异无统计学意义(P>0.05)。⑤单向混合淋巴细胞培养显示,转染构建质粒组刺激指数较未转染组和转染空质粒组明显降低(P<0.01),差异有统计学意义；而未转染组与转染空质粒组之间刺激指数差异无统计学意义(P>0.05)。<br>　　 结论:①淋巴细胞分离液密度梯度分离法可成功从小鼠骨髓细胞中分离造血干细胞。②携带H-2Db基因的逆转录病毒载体可高效稳定转染受体BALB/c小鼠骨髓造血干细胞,且感染后H-2Db基因可稳定表达。③构建的分子嵌合造血干细胞模型可以显著抑制T细胞增殖能力,为进一步研究分子嵌合诱导移植免疫耐受打下实验基础。