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产酶溶杆菌OH11胞外多糖合成相关基因的克隆及其与生物膜形成的关系

摘要利用质粒pSC137(含CmR的mariner转座子)对OH11进行转座诱变,成功构建了Lysobacter enzymogenes OH11的转座子插入文库。通过表型筛选,从5000个接合子中筛选到2个胞外多糖突变株OE1和048和1个脂多糖突变株OE3.在MM平板上,OE1和OE3菌落干燥,边缘皱缩;048菌落粘性增加。利用任意PCR技术,快速鉴定了OE1、OE3和048中转座子的插入位点。序列分析表明,在OE3中,转座子插入到了ABC(ATP-Binding Cassette)转运系统的关键基因中,该基因编码一个Permease蛋白。在048中,转座子插入到TypeⅣ泌出系统的关键基因中,该基因编码一个Pilin蛋白。在OE1中,转座子插入的基因在公共数据库中没有同源基因,提示该基因可能是L.enzymogenes特有的胞外多糖合成相关基因。生物膜试验表明,OE3能正常形成生物膜,而OE1和048形成生物膜的能力显著降低,同野生型相比,OE1和048形成生物膜的能力分别下降95%和82%。本研究是利用mariner转座子随机诱变并结合任意PCR对L.enzymogenes进行基因克隆的首饮报道。该方法为L.enzymogenes功能基因克隆提供了技术平台,也为研究胞外多糖和脂多糖与L.enzymongenes定殖的相关性奠定了研究基础

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