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夏枯草注射液对胰岛癌细胞PANC-1凋亡的影响及机制研究

摘要研究目的:<br>   通过研究夏枯草注射液(InjectionofPrunellaVulgaris,IPV)对人胰腺癌细胞系PANC-1的干预,观察其对胰腺癌细胞凋亡的影响,并探索其促进胰腺癌细胞凋亡的机制。<br>   研究方法:<br>   1.体外培养胰腺癌细胞PANC-1,以IPV干预PANC-1细胞。实验共分6组,1个空白对照组和5个药物干预组,干预组分别给予30、60、90、120、150mg/ml五个浓度梯度的IPV,干预12h、24h、36h和48h后,分别通过倒置相差显微镜观察各组胰腺癌细胞生长情况。<br>   2.MTT比色法观察PANC-1细胞被药物干预后的存活率,绘制不同干预时间IPV对PANC-1细胞的存活率曲线,并计算半数有效抑制浓度(IC50)。<br>   3.应用流式细胞仪技术,通过AnnexinV-EGFP/PI双染法检测不同浓度组的IPV对胰腺癌细胞干预24h后的细胞凋亡率。<br>   4.RT-PCR检测细胞Bax与bcl-2的相对表达量的变化。<br>   研究结果:<br>   1.倒置显微镜镜观察显示:随着IPV干预剂量的增加,胰腺癌细胞增殖明显受抑制,贴壁细胞逐渐减少。<br>   2.MTT检测结果显示:随着药物剂量的增加和干预时间的延长,IPV对PANC-1细胞抑制增殖作用逐渐增强,且在一定剂量范围内,明显具有剂量-时间依赖性(P<0.05),具有统计学意义,ICso=47.75mg/ml。<br>   3.流式细胞检测结果显示:IPV可以诱导PANC-1细胞凋亡,随着药物剂量的增加,PANC-1细胞的凋亡也随之增加,且诱导凋亡的作用主要表现在早期凋亡。<br>   4.RT-PCR检测结果显示:在IPV作用24h后,可使PANC-1细胞上调Bax和下调bcl-2基因表达。在一定剂量范围内,随着药物剂量的增加,bcl-2的表达逐渐降低,并呈现浓度依赖性(P<0.05);而Bax的表达逐渐增加,亦呈现浓度依赖性(P<0.05);Bax/bcl-2的比值逐渐增加,亦呈现浓度依赖性(P<0.05)。<br>   研究结论:<br>   1.IPV能抑制PANC-1胰腺癌细胞的增殖,并在一定剂量范围内呈剂量-时间依赖性;<br>   2.IPV能诱导PANC-1胰腺癌细胞凋亡;<br>   3.其机制:上调了Bax的表达,下调了bcl-2的表达,从而发挥了诱导凋亡、抑制增殖的作用。

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