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摘要金钗石斛为单子叶植物，属兰科石斛属，是中医中常见的药用植物，同时也是花卉市场上热销的兰花品种。组蛋白去乙酰化酶(HDACs)在植物生长和发育过程中发挥着多方面的作用。目前，HDACs在植物中的功能主要在拟南芥中获得。而到目前为止，尚未见到石斛中HDACs的报道。<br>　　本论文主要以金钗石斛中的两个组蛋白去乙酰化酶基因DnHDT1和DnHDA9为研究对象，通过生物信息学、基因克隆和转化等方法研究了DnHDT1和DnHDA9的基因结构、蛋白的基本特性、表达及生理功能。获得以下结果：<br>　　1.根据保守氨基酸的方法，获得DnHD～全长的ORF957bp，编码318个氨基酸。<br>　　DnHDT1与单子叶植物中的HD2家族成员的亲缘性比较近，而和双子叶植物的亲缘性比较远。具有HD2家族蛋白的结构特点。同时，对其整个肽链的亲水性、疏水性、亚细胞定位等进行了预测分析。预测DnHDT1为亲水的不稳定蛋白，非分泌蛋白，可能定位于细胞核。并且研究也证实其定位于细胞核。<br>　　DnHDT1在金钗石斛基因组中的拷贝数是两或三个。<br>　　DnHDT1在金钗石斛的根、茎、叶、花芽、花中都有不同程度的表达，其中在根中表达量最高；在花芽中，随着低温处理时间的延长，其表达量上调。<br>　　采用农杆菌介导的方法转化超表达载体35S∷DnHDT1，获得7株转基因拟南芥。其中转基因植株35S∷DnHDT1比野生型略微提前开花2d，并且叶片比较大，但是莲座叶数目没有显著的差异。FT、SOC1、FLC在超表达植株和野生型中的表达没有差异，但是LFY和AP1在超表达植株中的表达量有下调的趋势。<br>　　2.根据保守氨基酸序列和采用Tail-PCR方法，获得DnHDA9全长的ORF1287bp，编码428个氨基酸。<br>　　DnHDA9与玉米中的ZmHDA102和拟南芥中的AtHDA9的同源性分别高达88％和83％。蛋白质N-端的三分之二区域具有保守的组蛋白去乙酰化酶结构域。DnHDA9为亲水的稳定蛋白，非分泌蛋白，可能定位于细胞质。但是还需要研究进行进一步的证实。<br>　　DnHDA9在石斛基因组中的拷贝数是一或两个。<br>　　DnHDA9的表达模式和DnHDTy相似，在根中表达量最高；在花芽中，随着低温处理时间的延长，其表达量上调。<br>　　构建pDnHDA9∷GUS载体，农杆菌介导转化拟南芥，得到转基因植株20株，利用体视显微镜对其进行GUS染色观察。在转基因拟南芥的幼苗、根、茎生叶、茎及柱头中都有GUS表达。转基因幼苗在100μMABA、150mM甘露醇和150mMNaCl处理下，GUS基因表达都有所增强。<br>　　采用农杆菌介导的方法转化超表达载体35S∷DnHDA9，获得27株转基因拟南芥。还需要进一步的表型观察和分子鉴定。