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摘要目的:<br>　　应用MALDI-TOF MS技术，直接对血液、无菌体液中细菌进行鉴定，并对细菌的耐药性进行研究，开发了UF-1000i联合MALDI-TOF MS检测技术直接检测感染尿液标本，建立了血液、无菌体液鉴定新流程，创新了临床微生物鉴定方法，为临床快速、有针对性的治疗提供准确依据。<br>　　方法:<br>　　1.临床收取有泌尿系感染症状患者清洁中段尿液标本1456份，样本分为三份，分别进行传统方法、UF-1000i以及MALDI-TOF MS检测，结果分析UF-1000i联合MALDI-TOF MS与传统方法比较优越性。<br>　　2.MALDI-TOF MS灵敏度检测，将6种常见泌尿系感染细菌，包括大肠埃希菌、屎肠球菌、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯茵、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌分别进行倍比稀释，利用MALDI-TOF MS进行检测，研究MALDI-TOF MS的检测灵敏度。<br>　　3.MALDI-TOF MS对于混合菌检测，将大肠埃希菌与屎肠球菌，大肠埃希菌与铜绿假单胞菌分别以1∶1，1∶2，1∶4，1∶9，2∶1，4∶1，9∶1进行两两混合，MALDI-TOF MS进行检测，观察混合菌对于MALDI-TOF MS的影响。<br>　　4.细菌储存时间对于MALDI-TOF MS影响，将含有大肠埃希菌的尿液分装成多管，储存于4℃冰箱内，观察3h、5h、12h、24h、48h、72h、96h、6天及11天后MALDI-TOF MS检测结果。<br>　　5.MALDI-TOF MS与传统方法准确度比较，将两种方法不一致的细菌进行16SrRNA基因测序。<br>　　6.临床收取血培养阳性标本共105份，其中，含碳瓶共75份;非含碳瓶30份，利用MALDI-TOF MS技术直接进行细菌鉴定。<br>　　7.经Vitek2微生物鉴定仪检测ESBL阳性大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌及产酸克雷伯菌分别3株与头孢噻肟（头孢他啶）及头孢噻肟（头孢他啶）和棒酸孵育，MALDI-TOF MS检测药物被细菌ESBL水解情况。<br>　　8.临床收取3份含革兰氏阴性杆菌的尿液进行研究，首先利用MALDI-TOF MS进行细菌鉴定，然后进行ESBL检测。<br>　　结果:<br>　　1.研究临床疑似泌尿系感染共1456份标本。最终结果，UF-1000i和MALDI-TOF MS联用与传统方法一致数量为1373份，占94.3％，正确率为94.8％。<br>　　2.革兰氏阴性杆菌（除大肠埃希菌）所需细菌浓度为104/ml，大肠埃希菌所需细菌浓度为2.5×105/ml，屎肠球菌所需细菌浓度为5.0×105/ml，金黄色葡萄球菌所需细菌浓度为1.2×105/ml。<br>　　3.当两种细菌以1∶1、1∶2比例进行混合时，两种细菌均能被MALDI-TOF MS同时检测，当两种细菌混合比例加大，优势菌则容易被检测出。当两种细菌以1∶9比例混合时，只有1种优势菌被检测出。<br>　　4.含大肠埃希菌的尿标本储存6天内，分值均能＞2.0以上。但储存至11天，虽然MALDI-TOF MS能够报告为大肠埃希菌但是分值已经＜1.7，结果不可靠。<br>　　5.传统方法鉴定的2例雷氏普罗威登斯菌和6例鹑鸡肠球菌，经MALDI-TOFMS鉴定分别为奇异变形杆菌和屎肠球菌，并经16S rRNA基因测序后结果与MALDI-TOF MS一致。<br>　　6.临床收取不含碳粉血培养瓶共30份，经MALDI-TOF MS检测，革兰氏阴性杆菌鉴定率为93.3％，革兰氏阳性球菌鉴定率为69.2％。总鉴定率为83.3％;含碳粉血培养瓶共75份，革兰氏阴性杆菌鉴定率为76.5％，革兰氏阳性球菌鉴定率为36.6％。总鉴定率为54.7％。<br>　　7.ESBL阳性四种细菌与头孢噻肟（头孢他啶）以及头孢噻肟（头孢他啶）和棒酸混合孵育，经MALDI-TOF MS检测，均能捕获到药物被细菌ESBL水解形式;加入抑菌酶棒酸后，药物原有形式再次出现。与传统检测方法结果一致。<br>　　8.传统方法检测，1号为大肠埃希菌，ESBL阳性;2号标本为大肠埃希菌，ESBL阴性;3号标本为奇异变形杆菌，ESBL阳性。经MALDI-TOF MS检测1号为大肠埃希菌，3号为奇异变形杆菌，2号未检测出。ESBL检测结果，1号和3号细菌与头孢噻肟孵育后，药物被水解，可检测到药物水解后两种形式，分子量分别为414.5和370.5;加入棒酸，药物水解被抑制，但仍检测到药物水解峰，峰值比前者低。<br>　　结论:<br>　　1.UF-1000i联合MALDI-TOF MS能够快速、准确的对原始感染尿标本进行鉴定。这项技术可能在诊断泌尿系感染方面代替传统方法。但是目前还存在问题，即混合菌感染的问题，这就要求MALDI-TOF MS必须提高其软件的分析功能。<br>　　2.MALDI-TOF MS能够对血培养阳性瓶内细菌快速鉴定，非含碳组鉴定率较高，达到80％以上，且革兰氏阴性杆菌比革兰氏阳性球菌更容易被鉴定出。此方法可以在血培养鉴定中占主导，未鉴定出的标本可利用传统方法进行补充。<br>　　3.本研究对细菌产ESBL情况进行了研究，MALDI-TOF MS技术能够快速检测细菌是否产ESBL，但对细菌量要求较高，因此细菌检测前纯化过程非常重要。<br>　　创新点:<br>　　1.UF-1000i联合MALDI-TOF MS能够迅速筛检出60％以上阴性标本，在10分钟内报告细菌阴性鉴定结果，94.8％的尿液标本在30分钟之内向临床发放报告，极大的改变传统方法给临床诊疗造成的障碍，使患者得到快速、有针对性的医治。<br>　　2.MALDI-TOF MS能够对血培养阳性瓶内细菌进行快速鉴定，虽然对于含碳瓶鉴定率不足60％，但针对败血症的危害度，快速、有针对性治疗至关重要。而未鉴定出样本，可用传统方法进行补充。<br>　　3.MALDI-TOF MS能够快速检测细菌是否产ESBL，为临床提供快速、可靠的耐药性分析。细菌的鉴定和药敏表型分析(ESBL)可同时利用MALDI-TOF MS进行检测，快速回报临床。