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CdSe/ZnS量子点对大肠埃希菌的直接标记及毒性研究

摘要目的:应用CdSe/ZnS量子点(Quantum Dots,QDs)标记大肠埃希菌DH5α(Escherichia coli DH5α),评价CdSe/ZnS量子点对所标记细菌的毒性,探讨CdSe/ZnS量子点用于活体标记及示踪细菌的可行性。<br>  方法:用0.1mol/L CaCl2溶液处理E.coli DH5α,制备感受态细菌,分别将12.5nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L和200nmol/L CdSe/ZnS量子点与处于感受态的E.coli DH5α进行转化与直接标记,同时以经同样处理,但未加CdSe/ZnS量子点的感受态E.coli DH5α和与上述浓度CdSe/ZnS量子点单纯混合培养的非感受态E.coli DH5α(未经CaCl2溶液处理)作为对照。在荧光显微镜下,观察细菌发光及其标记情况,并测定细菌相对荧光单位(relative fluorescenceunit,RFU);应用多功能酶标仪检测OD600值,绘制生长曲线;计数细菌菌落数判定不同浓度CdSe/ZnS量子点标记的细菌的存活率;应用透射电子显微镜观察不同浓度CdSe/ZnS量子点标记的细菌的超微结构变化。<br>  结果:荧光显微镜下,当CdSe/ZnS量子点浓度≥50nmol/L时,可见CdSe/ZnS量子点标记的非感受态E.coli DH5α出现零星点状荧光,荧光细菌标记率小于6%,发光强度小于0.6,细菌存活率不受影响;透射电镜(transmission electronmicroscope,TEM)下只有当CdSe/ZnS量子点浓度≥100nmol/L时,细菌的超微结构才出现轻微的变化。而所有浓度CdSe/ZnS量子点标记的经CaCl2处理的感受态E.coli DH5α均发出荧光,CdSe/ZnS量子点浓度为12.5nmol/L时,被标记的细菌呈短棒状发光,荧光细菌标记率约为24%,但RFU值较低,约0.6,存活率较对照无明显改变,细菌超微结构的变化也不明显;CdSe/ZnS量子点浓度达到25nmol/L及以上时,被标记的细菌呈点或片状发光。随着量子点浓度的增加,荧光细菌标记率逐渐增大直至40%(P<0.05),RFU也逐渐增大直至12左右(P<0.01),二者均明显高于同浓度CdSe/ZnS量子点标记的非感受态细菌(P<0.01),但细菌存活率逐渐下降(P<0.05),细菌的细胞壁及细胞膜出现模糊、破损,胞质及核质电子密度逐渐降低,胞质间间隙消失,菌体空化加重,甚至出现胞质及核质渗漏。<br>  结论:应用CaCl2转化的方法可以明显提高CdSe/ZnS量子点对E.coli DH5α标记效率;但CdSe/ZnS量子点进入细菌内部后对细菌的毒性较大。CdSe/ZnS量子点不适合用于感受态细菌的活体标记及细菌示踪;通过菌落计数和透射电镜方法可以更精确、直观地来综合评价量子点对所标记细菌的毒性影响。

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