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摘要目的:<br>　　肝脏为人体最大的实质性器官，也是最为重要的器官之一，承担着机体重要的生物化学物质合成、代谢、解毒等功能。同时，肝脏比较脆弱，容易受到毒物、药物以及有毒代谢产物等各种因素的损害。近年来，随着人民生活压力的加大，生存环境遭到污染，食品药品安全事故频发，与肝功能损伤相关的疾病的发病率呈逐年上升的趋势。因此，防治肝功能损伤显得极为迫切，也是当前研究热点。<br>　　中药具有多靶点、副作用少、疗效好等治疗特点，因此使用中药防治肝功能损伤越来越受到国内外学者的重视。虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.etZucc.的干燥根茎和根，具有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰等功效。虎杖苷(polydatin，PD)为其指标性成分，又名白藜芦醇苷。现代药理学研究表明，PD具有保肝、抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡等多种作用。本实验拟先通过体外抗氧化评价方法测定PD的体外抗氧化活性，再通过D-半乳糖(D-gal)致肝损伤模型和酒精肝损伤模型来研究PD对肝损伤的干预作用及其机制。<br>　　方法:<br>　　1.PD体外抗氧化活性的测定<br>　　测定PD对DPPH、ABTS、·O2-、·OH自由基的清除能力，综合评价PD的体外抗氧化能力。<br>　　2.PD对D-gal所致的肝损伤的保护作用及其机制<br>　　将昆明小鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常组(Vehicle)，模型组(D-gal，200 mg/kg)，阳性药物VE组(VE，200 mg/kg)，PD低中高三个剂量组(50、100和200 mg/kg)。除正常组外，其余各组小鼠每天下午颈背部皮下注射D-gal，正常组注射相同体积的生理盐水。同时，除正常组和模型组灌胃生理盐水外，其余各组灌胃相应的药物。造模给药8周，每天观察小鼠一般形态特征，例如饮食，体重增长，精神状态，毛发，行为活动等。末次造模给药24 h后，摘眼球取血，解剖取各个脏器（脾脏、胸腺、肾脏）并测量其脏器指数。从每只小鼠的相同部位取一定量的肝组织，多聚甲醛固定，H&E染色方评价肝组织病理结构变化;离心分离血清，用全自动生化检测仪测定血清中ALT和AST的含量;运用ELISA技术分析血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平;取肝组织制备成肝匀浆后，生化定量法分析小鼠肝组织匀浆中T-AOC能力，SOD、CAT、 GSH-PX、 MDA的含量。利用Western-blot技术分析检测Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达以进一步探讨PD对D-gal所致的肝损伤的保护作用机制。<br>　　3.PD对酒精所致的肝损伤的保护作用及其机制<br>　　60只健康雄性SD大鼠随机分为6组:正常组(Vehicle)，模型组(Model)，阳性药物水飞蓟素组(Sily)，PD低中高三个剂量组(25、50和100 mg/kg)，每组10只。除正常组和模型组灌胃给予生理盐水，其余各组大鼠预先灌胃给药7天，第8天开始，模型组和药物组通过灌胃给予56％的乙醇(7 ml/kg)诱导酒精肝损伤模型，共造模5次，每次间隔12h。末次造模给药12h后腹主动脉取血，离心获得血清，用全自动生化检测仪测定血清中ALT、AST、ALP、LDH的含量;从每只小鼠的相同部位取一定量的肝组织，多聚甲醛固定，H&E染色方评价肝组织病理结构变化，油红O染色方评价肝脂肪变性的严重程度;运用ELISA技术分析血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平;取肝组织制备成肝匀浆后，生化定量法分析小鼠肝组织匀浆中TG、MDA、ROS、SOD、CAT、GSH-PX的含量。利用Western-blot技术分析检测CYP2E1、Nrf2、HO-1、TLR4、NF-κB p65的表达以进一步探讨PD对酒精所致的肝损伤的保护作用机制。<br>　　结果:<br>　　1.PD体外抗氧化活性的测定<br>　　PD有很好的体外抗氧化活性，可有效清除DPPH、ABTS、·O2-、·OH，IC50值分别为87±2.10μg.mL-1，20±1.30μg.mL-1，125±3.50μg.mL-1，181±2.90μg.mL-1。<br>　　2.PD对D-gal所致的肝损伤的保护作用及其机制<br>　　对各组小鼠的一般形态特征观察发现，模型组小鼠毛色暗淡，发黄，脱毛现象严重，体重瘦弱，精神萎靡，活动量减少。与模型组相比，PD各剂量组的体重，毛色，精神状态等都有不同程度的恢复。<br>　　与模型组相比，PD中、高剂量组能明显缓解肝损伤模型小鼠脾脏、胸腺指数的下降(p＜0.05)，对肾脏指数的下降也有一定程度的缓解，但没有统计学意义(p＞0.05)。<br>　　小鼠连续八周颈背部皮下注射D-gal后，模型组小鼠血清中ALT、AST含量明显高于对照组，给予PD后，显著抑制了两者的升高。H&E结果表明，与正常组相比，模型组小鼠表现出肝细胞肿胀、坏死、炎性浸润等病理结构变化，PD各剂量组小鼠能够不同程度的减轻肝组织微观结构的病理变化。<br>　　与模型组相比，PD各剂量组能够提高肝组织匀浆中T-AOC水平及CAT、 GSH-Px、SOD活性，降低MDA的含量;降低TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌量;Western-blot结果显示，PD能够上调与细胞凋亡有关的蛋白Bcl-2的表达，下调Bax和Caspase-3的表达。<br>　　3.PD对酒精所致的肝损伤的保护作用及其机制<br>　　肝功能指标分析表明，PD各剂量组能显著降低酒精性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、ALP、LDH水平，并且H&E染色结果发现肝脏组织出现炎性浸润，肝实质性坏死，肝细胞索紊乱;油红O染色结果发现模型组大鼠肝组织细胞细胞质内出现大量脂肪滴，而口服灌胃PD则该类现象明显改善。<br>　　与模型组相比较，PD各剂量组能够降低肝组织匀浆中TG、MDA、ROS的含量，而SOD、CAT、GSH-PX的含量则有不同程度的升高。CYP2E1、Nrf2/OH-1蛋白与氧化应激的形成关系密切，PD能通过下调CYP2E1蛋白的表达，上调Nrf2/OH-1蛋白的表达降低肝组织氧化应激水平。<br>　　PD能显著降低血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平，且能下调与炎症反应有关的TLR4/NF-κB蛋白的表达。<br>　　结论:<br>　　体外抗氧化能力测试证实了PD具有良好的体外抗氧化能力;D-gal致肝损伤模型说明了PD具有一定的抗D-gal致肝损伤的作用，其作用机制可能与提高机体的抗氧化能力，抑制炎症反应和抑制肝细胞凋亡有关;另外，采用经典的酒精致肝损伤模型，证实了预先给予大鼠一定量的PD可以缓解酒精对肝脏的损害，其作用机制可能是通过调节CYP2E1、Nrf2/OH-1和TLR4/NF-κB等通路来降低机体的氧化应激水平和炎症反应来实现的。