摘要目的:了解2a型丙型肝炎病毒基因组5'非编码区-包膜区核苷酸序列,研究其序列变异特征,为进一步探讨HCV基因的调控、结构蛋白的生物学功能及疫苗的研制打下基础.方法:144份血清标本均作逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR),经限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)法初步筛选出一例 2a/Ⅲ型HCV感染者.从其血清中扩增出三条分别约800bp、770bp、1100bp的片段,第一条片段直接与pGEM-T载体连接,后两条片段分别以限制性内切酶EcoRI、BamHI和EcoRI、HindⅢ双酶切后连入pUC19载体中,再分别转化JM105感受态细胞,经RFLP和PCR法证实为阳性克隆后,用全自动序列分析仪测序.结论:分离株(HCF-JF)与HC-J6同属2a型,但同源性有一定差异.中国大陆2a型HCV5'UTR存在新的碱基突变.包膜区基因变异性大,所编码蛋白存在高变区,其间也有高度保守的序列和结构.
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