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摘要单克隆抗体(Monoclonal Atibody,McAb)3H11是用多种人胃癌细胞系免疫小鼠而获得的.免疫组化显示McAb 3H11可与多种肿瘤组织特异性反应,放射性核素标记的McAb 3H11已经成功试用于肿瘤原发灶的临床显像.因此,对McAb 3H11对应的抗原在肿瘤或正常细胞中的作用进行研究,对提高对肿瘤发生机制的认识水平具有重要意义.最近,我室已成功克隆McAb 3H11的对应抗原3H11 Ag,本研究旨在对3H11 Ag的细胞定位及功能作些初步探索.作为研究基因功能一个极有力的工具,我们首先制备了针对3H11 Ag的单抗和多抗.为此,将3H11 Ag的全长进行了原核表达、纯化并用之于免疫动物,制备了3H11 Ag的单抗和多抗.生物大分子在细胞中的定位与其所执行的生物学功能是密切相关的.我们将3H11 Ag与红色荧光蛋白融合表达于COS-7细胞,用激光共聚焦成像技术,结合细胞组分生化分析,证明3H11 Ag在胞浆和核内都有存在.将3H11 Ag分段与红色荧光蛋白融合,应用同样方法进行分析,结果证明3H11 Ag的细胞定位相关序列在其"C"端150个氨基酸残基内.将3H11 Ag过表达于COS-7细胞后,对细胞核与细胞质中3H11 Ag进行磷酸化分析,结果发现,与胞质中相比,进入细胞核内的3H11 Ag分子上的酪氨酸残基的磷酸化显著降低或消失;对细胞核作进一步的组分分析,显示3H11 Ag是一个DNA结合蛋白并紧密结合于核基质.为了进一步研究3H11 Ag在细胞中的功能,我们构建了3H11 Ag腺病毒基因转移系统.用3H11 Ag重组腺病毒感染胃癌MGC823细胞,结果显示3H11 Ag可以促进细胞的增殖,提高细胞的集落形成能力.此外,我们还对3H11 Ag在胃癌细胞系中的表达作了检测,结果表明3H11 Ag在不同来源的胃癌细胞系胃癌细胞系表达情况不一样,如在MGC823、SNU-1/5/16等细胞系中表达量较高.