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摘要本文采用十字花科极度耐寒的播娘蒿(Descurainia sophia)作为植物抗寒基因研究的材料。克隆播娘蒿的抗寒基因COR，为改造植物耐寒性提供新的材料。该基因的获得对从基因水平上揭示其抗寒机制，提高植物的耐寒性具有十分重要的意义。本实验研究的主要内容包括： 1.播娘蒿COR基因(DsCOR)的克隆。根据拟南芥cor15a基因及油菜的BN115等同源基因的保守区设计同源克隆简并引物。以播娘蒿总cDNA为模板，进行PCR扩增，获得了与拟南芥cor15a基因扩增片段大小相似、序列同源性84.7％的336bp的EST片段，再利用3’RACE和5’RACE技术得到DsCOR的ORF读框和完整的3’端非翻译区序列。 2.生物信息学分析DsCOR与拟南芥cor15a、油菜BN115的序列同源性分别为85.7％和75.4％。 3.该蛋白分子量为14.4KD，等电点6.83，为一个酸性蛋白。在pH7.0的环境中它带有-0.13电荷，摩尔消光系数为3840。 4.与十字花科拟南芥中的抗寒基因相比播娘蒿DsCOR具有以下特点：DsCOR具有5个主要的跨膜区域，分别位于20-40，99-121，181-199，253-270，345-369区域。另外，播娘蒿DsCOR击中2个主要的信号传导位点cAMP-andcGMP-依赖的蛋白激酶磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点，它们对于冷驯化过程中Ca2+信号的传导是十分重要的。 5.构建原核表达载体pET32-DsCOR，并成功在大肠杆菌BL21(DS3)中表达，融合表达蛋白的大小为31kD。 6.根据生物信息预测该蛋白具有的亲水特性，通过沸水浴方法纯化表达融合蛋白。经SDS-PAGE检测，得到高纯度的单一蛋白。