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摘要蛋白磷酸酶PP4(proteinphosphatase4，PP4)是丝/苏氨基酸磷酸酶家族的重要成员之一，从无脊椎动物到人具有高度的保守性。已有研究表明它与多个调节亚基形成多种复合物参与诸多细胞内功能事件重要的进程，PP4在果蝇与线虫中参与了中心体成熟，同源染色体交叉等进程，在哺乳动物细胞中参与了多个细胞信号通路的调节，以及剪接体复合物的组装，DNA损伤修复等多个事件。目前在哺乳动物细胞中，对PP4的研究主要在于其对信号通路的作用以及相互作用蛋白的研究，其对细胞生长的影响至今仍知之甚少。 为了进一步探讨PP4在哺乳动物细胞中的作用，本研究首先对PP4在细胞周期中的定位进行了探讨。本研究采用RT-PCR的方法克隆得到PP4全长cDNA，并原核表达了该蛋白，制备了针对PP4全蛋白的多克隆抗体。随后利用该多克隆抗体及针对PP4特异性肽段的抗体，利用间接免疫荧光技术，并结合HA，GFP分子标签以及PP4RL(PP4磷酸酶活性缺失突变体)对PP4在细胞周期中的定位进行了全面系统分析，结果发现PP4存在于两个不同的亚细胞库中，其中之一为已经被报道的中心体，在这个亚细胞库中，在间期及有丝分裂的中期、后期，PP4定位于中心体，末期从中心体上脱离；在另一个亚细胞库中，PP4呈现着丝粒-中板-中体的典型的着丝粒过客蛋白的分布。在新的亚细胞库中，在间期PP4主要定位于核里，在有丝分裂的早中期和中期PP4定位于着丝粒上，后期从着丝粒上脱离，迁移至中板，末期聚集于中体。 随后，通过转染表达正义PP4质粒，筛选出PP4高表达细胞株，以及利用RNRi技术获得PP4低表达的细胞株，并对其生物学功能进行研究。发现过表达PP4对细胞的生长影响不明显，而PP4表达的抑制对细胞的生长及周期有明显的影响。在PP4表达受抑制的细胞株中细胞形态、生长特性、细胞骨架及有丝分裂过程都发生明显变化。细胞生长速率变慢，细胞群体中DNA含量为4N的细胞比率明显增高。这一结果是由细胞群体中出现了高比例的多核细胞造成的，进一步的分析揭示高比例多核细胞的产生是由于PP4表达下降致使细胞有丝分裂和胞质分裂受到严重干扰所致。由此推测PP4对于保证细胞有丝分裂及胞质分裂的正常进行具有重要作用。此外，本研究还应用双向电泳和质谱技术对干扰细胞株和对照细胞株的蛋白表达谱进行分析，对PP4参与细胞周期调控的机理进行初步的探讨。 本研究工作对PP4的定位及功能作了一系列的探讨，发现了PP4在细胞中的新的定位区，同时对PP4高表达细胞株及PP4干扰细胞株的细胞形态、细胞周期进程、细胞骨架及蛋白表达差异进行了研究，这些结果将推动PP4在细胞中功能的深入研究。