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CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42的构建及其稳定转染HeLa细胞模型的建立

Construction of recombinant vector pEGFP-C2-CD41-42 of CD41-42 mutation β thalassemia and establishment of its stably transfected HeLa cell model

摘要:

目的:构建CD41-42突变型β地中海贫血重组载体pEGFP-C2-CD41-42和HeLaCD41-42细胞模型,为β地中海贫血CD41-42突变型细胞、小鼠模型建立及进一步基因治疗提供依据.方法:在β地中海贫血CD41-42突变的纯合子患者外周血中提取DNA,PCR法扩增含有βCD41-42的β-珠蛋白基因片段.将PCR产物βCD41-42珠蛋白基因克隆到pEGFP-C2载体中,用脂质体2000将pEGFP-C2-βCD41-42质粒转染HeLa细胞,观察转染后βCD41-42在HeLa细胞中荧光表达情况.RT-PCR法检测βCD41-42在HeLa细胞中的表达.结果:重组质粒pEGFP-C2-βCD41-42转染HeLa细胞24 h后细胞发出绿色荧光,G418筛选后,有大量荧光表达.RT-PCR扩增得到227 bp的特异性条带,而稳定转染pEGFP-C2空质粒的HeLa细胞中不表达特异性条带.结论:成功构建β地中海贫血pEGFP-C2-βCD41-42突变基因重组载体,并成功构建HeLaCD41-42细胞模型.

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作者: 曾雅畅 [1] 李慕军 [1] 陈萍 [1] 陈悦 [1] 陈静 [1] 庞莉莉 [1]
期刊: 《吉林大学学报(医学版)》2014年40卷2期 257-260,后插2页 ISTICPKUCSCDCAEMBase
分类号: R556
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140209
发布时间: 2015-09-18
基金项目:
广西壮族自治区科技基础条件平台建设项目资助课题 广西壮族自治区医疗卫生重点科研项目资助课题 广西医科大学优秀博士学位论文培育项目资助课题 广西壮族治自区卫生厅自筹课题
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