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重组腺病毒介导血小板衍生生长因子感染人类脐带间质干细胞的实验研究

Experimental study of recombinant adenoviral-mediated PDGF gene delivery of human umbilical cord derived mesenchymal stem cells

摘要:

目的 检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子(PDGF)对人类脐带间质干细胞(MSC)的感染能力,为将其用于基因治疗奠定基础.方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增人类PDGF的cDNA序列,构建重组病毒载体AdPDGF.分离培养人类脐带MSC.体外以不同感染复数感染MSC后,流式细胞术检测感染效率,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)表达.锥虫蓝染色及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测感染后细胞生存活力及增殖能力.酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中PDGF分泌水平.结果 成功构建病毒载体AdPDGF.其对MSC的感染效率随感染复数增加而增高,当感染复数为50时,达到最高,为87.36%.未感染的MSC、感染AdPDGF和对照病毒的MSC活力分别为(97.8 ±2.3)%、(91.9 ±4.0)%和(92.8 ±4.0)%.增殖能力分别为(100 ±16.8)%,(95.9±12.0)%和(87.5±9.7)%,感染AdPDGF的MSC与两个对照比较差异均无统计学意义(P>0.05).感染48 h后MSC能有效分泌PDGF,感染复数为10、30、50时,PDGF分泌水平分别为(1.53±0.37)、(3.03 ±0.68)和(5.25±0.92)ng/ml,MSC-GFP及MSC组未检测到有PDGF分泌.结论 成功构建AdPDGF重组腺病毒并高效感染人类脐带MSC.

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