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Lenti-eGFP体外转染兔角膜上皮细胞的实验研究

Lenti-eGFP transfection into rabbit corneal epithelial cells in vitro

摘要:

目的:观察慢病毒载体(Lentivirus vectors,LVs)介导的增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescence protein,eGFP)基因转染离体兔角膜上皮细胞对其生理功能的影响.方法:角膜上皮细胞的原代及传代培养并细胞鉴定.分正常细胞组(对照组)与转染细胞组.LVs介导的eGFP基因(Lenti-eGFP)以最适感染复数(Multiples of infection,MOI)=100转染角膜上皮细胞并成功传代,倒置荧光显微镜观察eGFP的表达情况.HE染色光镜观察及透射电子显微镜观察2组细胞的形态及超微结构变化;计算2组细胞在传代第2、3、4天的细胞增殖率;流式细胞技术(Flow cytometer,FCM)检测2组角膜上皮细胞凋亡率的变化.结果:eGFP于转染48 h即开始有表达,随着转染时间的延长其在角膜上皮细胞内的表达增强.细胞成功传代后,eGFP仍明显表达于角膜上皮细胞.在最适感染复数,即MOI=100时,HE染色光镜观察见转染组细胞形态规则,无异常核分裂像,与对照组角膜上皮细胞形态一致;透射电子显微镜观察转染组细胞超微结构与对照组细胞无明显差别.2组细胞分别在传代第2、3、4天的增殖率差异无统计学意义(P>0.05).FCM检测细胞凋亡率2组间无明显差异(P>0.05).结论:Lenti-eGFP可以有效转染离体兔角膜上皮细胞,但对上皮的影响需要进一步探讨.

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作者: 王继东 [1] 马晓辉 [2] 兰芬 [3] 王健 [4] 陈余 [5] 范原铭 [6] 杜之渝 [3]
作者单位: 重庆医科大学附属第一医院妇产科,重庆,400016 [1] 山东省胸科医院呼吸内科,济南,250000 [2] 重庆医科大学附属第二医院眼科,重庆,400010 [3] 山东淄矿集团中心医院消化内科,淄博,255120 [4] 山东淄矿集团中心医院普外科,淄博,255120 [5] 重庆医科大学附属第一医院内分泌外科,重庆,400016 [6]
期刊: 《重庆医科大学学报》2011年36卷12期 1412-1415页 ISTICPKUCSCD
分类号: Q789R322.9
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3969/j.issn.0253-3626.2011.12.002
发布时间: 2012-04-19
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