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APE1 siRNA表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞APE1表达的抑制作用

Construction of APE1 siRNA expression vector and its inhibition to APE1 in osteosarcoma cells

摘要:

目的构建DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用.方法设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence 2.0-U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,经酶切鉴定和测序确认.应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达,同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系.结果通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了APE1 siRNA表达载体.免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制APE1基因表达效率为72%~95%,而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著.结论成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达.

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作者: 王东 [1] 仲召阳 [1] 李增鹏 [2] 张沁宏 [2] 卿毅 [3] 杨宇馨 [3]
期刊: 《第三军医大学学报》2006年28卷2期 97-100页 ISTICPKUCSCD
分类号: R394-33R73-36R738.1
栏目名称: 专题报道:肿瘤分子病理和分子靶向治疗
DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.02.003
发布时间: 2006-03-23
基金项目:
中国科学院资助项目 第三军医大学校科研和教改项目
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