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三重实时荧光PCR相对定量法快速诊断21和X染色体数目异常

摘要:

目的 建立三重TaqMan实时荧光定量PCR体系,快速诊断21、X染色体数目异常.方法 选取21号染色体唐氏综合征特异区域(DSCR3)和X染色体1113K DNA序列范围分别作为21号和X染色体目的 基因,同时选择12号染色体上磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参比基因,分别设计引物和TaqMan探针,经PCR反应体系优化,采用单管三重及2-ΔΔCt相对定量数据分析,根据基因拷贝数变化诊断21号和X染色体数目异常,并进行方法学应用评价.结果 通过优化,模板量在5~30 ng/μl时3个基因都可以得到有效扩增,目的 基因和参照基因扩增效率基本一致,均接近100%.采用上述体系检测24例正常标本和20例异常标本(包括血液和羊水标本),正常标本的21号2-ΔΔCt值均为2,而唐氏综合征患者均为3;正常男性的X染色体2-ΔΔCt值均为1,而正常女性均为2.其临床标本检测结果的敏感性、特异性均达100%.结论 建立的三重TaqMan实时荧光PCR相对定量法快速诊断21和X染色体数目异常方法,稳定性、可靠性和实用性均较好.

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