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调节性T细胞在肝再生增强因子免疫抑制机制中的作用研究

Role of regulatory T cells in immunosuppression of human augmenter of liver regeneration in vitro

摘要:

目的 观察人肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)对体外活化的单个核细胞中调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的增殖、分化及抑制性细胞因子TGF-β1、IL-10表达水平的影响,探讨ALR的免疫抑制机制.方法 梯度离心分离正常人外周血单个核细胞(human peripheral blood monoclear cells,PBMCs),分为对照组(Control组)、ConA刺激组(ConA组)和人ALR (hALR)干预组(ConA+ hALR组).ConA组和ConA+ hALR组分别给予ConA(5μg/mL)和hALR(30μg/mL)处理,对照组不处理.各组作用60h后,2-对磺酸基苯基-3..(4,5-二甲基噻唑)-5-(3-羧甲氧基苯基)-二氢四唑嗡盐[3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt,MTS]检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组CD4+ CD25+ FoxP3+ Treg细胞比例和细胞周期变化,Real-time PCR检测各组FoxP3 mRNA的表达,ELISA检测各组上清中细胞因子TGF-β1、IL-10浓度.结果 hALR能明显抑制ConA活化的PBMCs的增殖(P<0.01);与ConA组和Control组相比,hALR能显著增加CD4+ CD25+ FoxP3+ Treg细胞占CD4+T细胞的比例(P<0.01)和FoxP3 mRNA的表达(P<0.01),并且hALR能够解除ConA引起的Treg细胞周期G2/M期的阻滞(P<0.01).此外,与ConA组和Control组相比,ConA+ hALR组上清中TGF-β1和IL-10的浓度明显升高(P<0.01).结论 hALR可以通过诱导Treg细胞的增殖、分化以及促进TGF-β1和IL-l0的产生,从而达到免疫抑制的作用.

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