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Let-7d表达质粒的构建及其对卵巢癌细胞高迁移率A2蛋白及ras蛋白表达的抑制作用

Construction of let-7d expression vector and its inhibitory effect on HMGA2 and ras expression in human ovarian cancer cells in vitro

摘要:

目的 构建let-7d真核表达载体,研究let-7d对卵巢癌细胞生物学行为及蛋白表达的影响.方法 根据let-7d序列设计合成microRNA片段,定向克隆到pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR真核表达载体上,运用基因转染技术将其导入卵巢癌IGROV1细胞中,使let-7d基因过表达,以实时荧光定量PCR验证let-7d及高迁移率A2(HMGA2)基因的表达,并用Western blotting检测相关蛋白HMGA2的差异表达.以MTT绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡率,分析let-7d对IGROV1细胞增殖生长的影响.结果 成功构建针对靶向let-7d的表达质粒,将表达质粒转染人卵巢癌IGROV1细胞后,明显下调HMGA2的表达水平,而下调ras蛋白的作用较弱,没有前者明显.细胞表型研究显示,抑制HMGA2表达可能改变该细胞的恶性表型,表现在细胞增殖能力明显下降,自发凋亡率明显增加等.结论 Let-7d通过对HMGA2的调控,在改变卵巢癌IGROV1细胞恶性表型方面可能起重要作用.

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作者: 叶海燕 [1] 陈建国 [1] 黄小穗 [2] 郭爱林 [2] 郝佩佩 [3]
期刊: 《南方医科大学学报》2012年32卷12期 1752-1757页 MEDLINEISTICPKUCSCD
分类号: R34R737.31
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.3969/j.issn.1673-4254.2012.12.015
发布时间: 2013-03-08
基金项目:
广东省科技计划项目 广东省医学科研基金(A2008004):广东省自然科学基金
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