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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的原核表达及多克隆抗体的制备

Prokaryotic expression of PBP2a of methicillin resistant staphylococcus aureus and preparation of its polyclonal antibody

摘要:

目的 研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a (PBP2a)的原核表达,及PBP2a多克隆抗体的制备.方法 根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了1对寡核苷酸引物,应用PCR法从MRSA基因组中获得编码PBP2a全长的DNA,将此目的 基因片段克隆至pET32a(+)载体,转化E.coli BL21(DE3);经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术纯化目的 蛋白;用目的 蛋白免疫小鼠3~8次后,收获血清并鉴定.结果 成功构建了PBP2a原核表达载体,并获得了高效表达;利用纯化的蛋白制备了理想的多克隆抗体.结论 利用分子克隆技术,获得了高纯度的PBP2a蛋白并制备了多克隆抗体,为其进一步研究奠定了基础.

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